警犬黃曲霉毒素中毒后血漿內(nèi)源性代謝物的GC-MS分析.pdf

1、黃曲霉毒素（afaltoxin，AF）是黃曲霉菌、寄生曲霉菌等產(chǎn)毒菌株產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，廣泛存在于霉變的動(dòng)物飼料中。AFB1是一種毒性極強(qiáng)的肝毒素，動(dòng)物采食含有AF的飼料后主要引起肝臟損傷。而肝臟是機(jī)體物質(zhì)代謝的樞紐，承擔(dān)了大部分的合成、分解、轉(zhuǎn)化和排泄等代謝過程，一旦受損，將導(dǎo)致糖類、脂類、氨基酸等物質(zhì)的代謝紊亂。因此從代謝的角度對(duì)黃曲霉毒素中毒進(jìn)行研究非常重要。代謝組學(xué)（Metabonomics）能夠反映細(xì)胞、體液的內(nèi)源性和外源性

2、代謝物濃度與機(jī)體功能之間的關(guān)系，已在醫(yī)學(xué)、生物學(xué)等眾多領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。而氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）聯(lián)用技術(shù)具有較強(qiáng)的分離分析能力，靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，而且有商品化的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)，可對(duì)代謝物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行快速鑒定，適合于代謝組學(xué)分析。目前將代謝組學(xué)技術(shù)應(yīng)用于警犬AF中毒的研究在國(guó)內(nèi)外還未見報(bào)道。因此，本論文以AF中毒犬的血漿為研究對(duì)象，通過化學(xué)衍生化反應(yīng)對(duì)代謝物進(jìn)行修飾，建立了基于代謝組學(xué)的GC-MS分析方法，研究警犬AF中毒后血漿代

3、謝物的變化，主要研究?jī)?nèi)容如下：
　　 1.警犬血漿內(nèi)源性代謝物譜的GC-MS分析方法的建立
　　 以健康犬血漿為分析對(duì)象，研究建立了內(nèi)源性代謝物譜的GC-MS分析方法。在對(duì)血漿樣品的制備方法，色譜分析條件進(jìn)行綜合考察的基礎(chǔ)上，獲取了一個(gè)峰容量大、分離效果佳的GC-MS分析條件，并對(duì)其進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。結(jié)果表明，建立的GC-MS分析方法穩(wěn)定可靠，能較好地表征血漿樣品的代謝物譜特征，可望用于代謝組學(xué)研究。
　　 2.

4、警犬血漿內(nèi)源性代謝物的GC-MS分析
　　 利用氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）技術(shù)對(duì)德國(guó)牧羊犬，史賓格犬和拉布拉多犬三個(gè)警用品種健康犬的血漿進(jìn)行分析研究。峰挑選后發(fā)現(xiàn)三個(gè)不同品種健康犬的血漿中有38種共有內(nèi)源性代謝物，主要是氨基酸、脂肪酸，糖類等小分子量的化合物。通過對(duì)檢測(cè)到的38種共有的內(nèi)源性代謝物比較分析，發(fā)現(xiàn)部分代謝物的含量在三個(gè)品種之間存在差異。本章實(shí)驗(yàn)所得到的健康犬血漿內(nèi)源性代謝物譜為黃曲霉毒素中毒犬血漿內(nèi)源性代謝物的檢

5、測(cè)提供了一個(gè)依據(jù)。
　　 3.黃曲霉毒素中毒犬血漿代謝組的GC-MS分析
　　 運(yùn)用代謝組學(xué)方法研究黃曲霉毒素（aflatoxin，AF）對(duì)犬肝臟的損傷作用。通過氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)（GC-MS）分析AF中毒犬血漿中的代謝物譜，使用主成分分析（PCA）法研究犬AF中毒后血漿內(nèi)源性代謝物譜的變化情況。結(jié)果表明，犬AF中毒后，血漿內(nèi)源性代謝物譜隨中毒時(shí)間的推移發(fā)生了相應(yīng)的變化。血漿中的部分氨基酸（如L-異亮氨酸、甘氨酸、L-蘇