杭州茶內(nèi)生擬盤(pán)多毛孢資源、多樣性及分類(lèi)研究.pdf

1、植物內(nèi)生真菌是自然界生物多樣性的重要組成部分，擬盤(pán)多毛孢是植物內(nèi)生真菌的重要類(lèi)群。茶是一種多年生的木本常綠植物，是杭州重要的經(jīng)濟(jì)作物。 本論文對(duì)杭州茶內(nèi)生擬盤(pán)多毛孢資源、多樣性及分類(lèi)學(xué)進(jìn)行了研究，取得以下結(jié)果： 1.根據(jù)Steyaert(1949)，Guba(1961)，Nag Raj(1993)的分類(lèi)系統(tǒng)鑒定杭州茶內(nèi)生擬盤(pán)多毛孢10個(gè)種：小孢擬盤(pán)多毛孢(Pestalotiopsis microspora)、棒形擬盤(pán)多毛

2、孢(Pestalotiopsis clavispora)、異角狀擬盤(pán)多毛孢(Pestalotiopsis heterocornis)、條紋擬盤(pán)多毛孢(Pestalotiopsisvirgatula)、(榕樹(shù))無(wú)花果擬盤(pán)多毛孢(Pestalotiopsis fici)、中國(guó)擬盤(pán)多毛孢(Pestalotiopsis sinensis)、異色擬盤(pán)多毛孢(Pestalotiopsis versicolor)、石楠擬盤(pán)多毛孢(Pestalotio

3、psis photiniae)、茶擬盤(pán)多毛孢(Pestalotiopsis theae)、阿爾及利亞擬盤(pán)多毛孢(Pestalotiopsis algeriensis)。 調(diào)查發(fā)現(xiàn)，茶內(nèi)生擬盤(pán)多毛孢種類(lèi)豐富，可以在茶枝、茶葉、茶花(極少)上分離到，每個(gè)茶品種有至少3種以上的內(nèi)生擬盤(pán)多毛孢。 2內(nèi)生擬盤(pán)多毛孢物種多樣性 2.1內(nèi)生擬盤(pán)多毛孢與茶品種的關(guān)系：龍井長(zhǎng)葉分離到內(nèi)生擬盤(pán)多毛孢多達(dá)10種，菊花春和龍井43中各分

4、離到3種，內(nèi)生擬盤(pán)多毛孢的分離率與該茶品種的內(nèi)生擬盤(pán)多毛孢的物種多樣性相關(guān)，如龍井長(zhǎng)葉內(nèi)生擬盤(pán)多毛孢的分離率最高，其多樣性也最豐富。 2.2茶內(nèi)生擬盤(pán)多毛孢的定殖狀況：茶每個(gè)品種葉片上的定殖率都很低，如龍井43、龍井長(zhǎng)葉、菊花春葉片分別為0.27％、0.83％、1.9％，枝條的內(nèi)生擬盤(pán)多毛孢定殖率相對(duì)較高，龍井43、龍井長(zhǎng)葉、菊花春分別為4.2％、3.8％、6％。 2.3茶不同品種內(nèi)生擬盤(pán)多毛孢的優(yōu)勢(shì)種及多樣性指數(shù)：茶內(nèi)

5、生擬盤(pán)多毛孢的優(yōu)勢(shì)種是茶擬盤(pán)多毛孢(Pestalotiopsis theae)(分離率為0.94％)、棒形擬盤(pán)多毛孢(Pestalotiopsis clavispora)(分離率為0.58％)、異角狀擬盤(pán)多毛孢(Pestalotiopsis heterocornis)(分離率為0.39％)。茶三個(gè)品種(龍井長(zhǎng)葉、菊花春和龍井43)內(nèi)生擬盤(pán)多毛孢物種多樣性指數(shù)分別為0.7663、0.8360和2.0614，物種豐富度指數(shù)分別為10、3和3

6、，從群落系數(shù)看三個(gè)品種的內(nèi)生擬盤(pán)多毛孢的群落相似性，龍井43和菊花春內(nèi)生擬盤(pán)多毛孢群落之間屬于中高相似水平，龍井43、菊花春和龍井長(zhǎng)葉之間屬于低相似水平。 2.4茶內(nèi)生擬盤(pán)多毛孢定殖率的季節(jié)變化 茶內(nèi)生擬盤(pán)多毛孢在冬季定殖率最高(0.92％)，春季和秋季次之，夏季最低(0.2％)；茶內(nèi)生擬盤(pán)多毛孢定殖率的變化與溫度變化相應(yīng)，在一月份最高，之后逐漸下降，到八月份到達(dá)最低(0)，然后又逐漸升高。 3擬盤(pán)多毛孢屬分子系

7、統(tǒng)學(xué)研究 3.1擬盤(pán)多毛孢屬種間與系統(tǒng)學(xué)關(guān)系 以50個(gè)菌株的rDNA中的ITS(含ITS1和ITS2)和5.8S基因序列，用ClustalX(1.81)按1000次重復(fù)產(chǎn)生鄰位連接樹(shù)進(jìn)行比較建立了擬盤(pán)多毛孢屬的分子系統(tǒng)樹(shù)。結(jié)果表明，內(nèi)生擬盤(pán)多毛孢首先分A和B兩個(gè)分枝，A分枝菌株分生孢子的有色胞顏色為暗色(暗褐色至黑色(dresden brown至olivaceous black))、同色或異色(Ridgway,1912)

8、；B分枝的菌株分生孢子的有色胞顏色為淡色(淡黃褐色至淡橄欖褐色(yellow ocher至tawny-olive))、同色；A分枝下的A1和A2兩個(gè)分枝明顯，A1分枝頂端附屬絲末端不膨大；A2分枝頂端附屬絲末端膨大。A1分枝下P.clavispora、P.photiniae、P.zonata、P.versicolor、P.gracilis、P.foedans的菌株相互交錯(cuò)，種形態(tài)大小是相互重疊；A2分枝下P.theae、P.fiei菌株

9、聚在一起；B分枝下有B1和B2兩個(gè)分枝，其中B1分枝下P.microspora、P.neglecta、P.algeriensis的菌株聚在一起；B2分枝下有B22和B21兩個(gè)分枝，B21有一個(gè)菌株P(guān).sinensis；B22分枝下所有P.heterocornis菌株聚在一起。說(shuō)明分生孢子有色胞的顏色類(lèi)型是擬盤(pán)多毛孢屬真菌分類(lèi)的首要特征；頂端附屬絲末端是否膨大是擬盤(pán)多毛孢屬第二重要特征；分生孢子長(zhǎng)度和寬度的分種應(yīng)與系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的分枝與菌株的

10、形態(tài)相結(jié)合。 3.2以形態(tài)特征和分子系統(tǒng)樹(shù)相結(jié)合衡量擬盤(pán)多毛孢屬的種 A1分枝包含P.clavispora、P.photiniae、P.zonata、P.versicolor、P.gracilis、P.foedans，其菌株相互交錯(cuò)，種形態(tài)大小相互重疊，分生孢子異色，上部?jī)蓚€(gè)有色胞顏色為茶黃褐色或煤煙黑色，下部一個(gè)有色胞顏色為橄欖褐色，大小為21～27×6～8μm，頂端附屬絲2～4根，多3根為主，少數(shù)以2根為主，長(zhǎng)為15

11、～32 μm，從形態(tài)特征和分子系統(tǒng)樹(shù)分析，根據(jù)命名先后，種名應(yīng)為異色擬盤(pán)多毛孢(Pestalotiopsis versicolor)；A2分枝中包含了P.theae和P.fici的12個(gè)菌株，其分生孢子有色胞同色，頂端附屬絲呈匙狀膨大，大小在21～34×5～8 μm、頂端附屬絲21～34μm，從形態(tài)特征和分子系統(tǒng)樹(shù)分析，它們是同一個(gè)種，種名應(yīng)為Pestalotiopsistheaei B2分枝下有B22和B2 1兩個(gè)分枝，B21一個(gè)菌株

12、P.sinensis；B22分枝P.heterocornis所有菌株聚在一起，其分生孢子有色胞同色，黃褐色，頂端附屬絲不膨大，成異角狀，大小19.0～25.2×4.9～5.7 μm，頂端附屬絲長(zhǎng)11.3～19.6 μm，種名為異角狀擬盤(pán)多毛孢Pestalotiopsis.heterocornis;B1分枝P.microspora、P.neglecta、P.algeriensis的菌株，有色胞同色，以3或2根頂端附屬絲為主，分生孢子18～