菊科與黃連屬藥用植物的RAPD指紋分析.pdf

1、本文以菊科與黃連屬的部分藥用植物為材料，通過RAPD(Random AmplifiedPolymorphic DNA)技術在菊科藥用植物的聚類關系、黃連屬植物的RAPD反應體系與反應條件優(yōu)化、遺傳多樣性分析以及將RAPD標記轉化為SCAR(SequenceCharacterized Amplified Region)標記四個方面進行了研究，主要實驗結果如下：
　　 1.利用RAPD技術對七種菊科藥用植物的遺傳多樣性及親緣關系進行

2、了分析。從50條10 bp隨機引物中篩選出10個多態(tài)性好的引物進行RAPD擴增，擴增DNA片段數據用UPGMA聚類法構建系統發(fā)育樹。10條引物共擴增出337條帶，多態(tài)性帶337條。聚類結果顯示RAPD分子標記構建的系統發(fā)育樹在族內屬間與傳統分類系統一致。
　　 2.以三種黃連屬植物(中國黃連、三角葉黃連、峨眉野連)為材料提取其基因組，以峨眉黃連基因組為模板DNA，利用10 bp隨機引物進行黃連RAPD-PCR反應體系與反應條件的

3、優(yōu)化，并進行了DNA聚合酶的篩選；進一步以3引物1模板與1引物2模板組合來探討引入TD-PCR(Touch Down PCR)技術的優(yōu)點。結果表明在25μlRAPD-PCR反應體系中，引物、模板、dNTPs濃度分別為0.32μmol/L、0.40 mg/L、0.25mmol/L，DNA聚合酶選取PyrobestTM DNA聚合酶且用量為1U，反應程序為94℃2'；94℃50s，39℃1，72℃1'；退火溫度-0.5/cycle，至36.

4、5℃；94℃50s，36℃1，72℃1，33cycles；72℃3'時，黃連RAPD-PCR可獲得特異性高、重復性好、穩(wěn)定性強的標記。
　　 3.利用上述優(yōu)化的RAPD反應體系與反應條件對黃連屬三個物種——中國黃連、三角葉黃連和峨眉野連的基因組進行擴增，34種引物針對黃連屬10個模板的擴增條帶為528，多態(tài)性條帶比例為86.36％，峨眉野連為325，多態(tài)條帶比例為34.15％。隨機引物S55擴增的10個黃連模板的RAPD圖譜可將

5、黃連屬三個物種(中國黃連、三角葉黃連、峨眉野連)區(qū)別開來。種間是兩個生境的三角葉黃連相似性較高而聚在一起，所有的峨眉野連聚在一支，且中國黃連與三角葉黃連相對其與峨眉野連的相似度要高；峨眉野連的聚類是采集于黃灣茶地的鳳尾型與雙翼型峨眉野連聚為一支，白崖、三道河與人棚子溝三個采集點的峨眉野連聚為一支，聚類結果與峨眉野連的棲息地生態(tài)環(huán)境相一致。
　　 4.選取僅出現在三道河的兩種表型(風尾型和雙翼型)峨眉野連和黃灣茶地的風尾型峨眉野連