多菌靈降解菌的篩選鑒定及降解特性研究.pdf

1、多菌靈（Carbendazim）是一種廣譜、高效內(nèi)吸性苯并咪唑類殺菌劑，由于其殺菌譜廣、低毒、使用方便，在保護地蔬菜中常年廣泛應(yīng)用。然而其化學性質(zhì)穩(wěn)定，在土壤中降解半衰期較長，能持久地殘留在使用部位，故菜地土壤中已經(jīng)有相當高程度的積累。分離篩選能夠高效降解多菌靈的微生物是人們目前進行多菌靈環(huán)境污染治理、土壤生物修復(fù)的一種有效途徑。因此尋找并研究多菌靈降解菌是十分必要的。
　　 本研究以長期大量使用多菌靈的壽光蔬菜大棚土壤為研究對

2、象，通過富集培養(yǎng)分離得到2個降解多菌靈效果較好的菌株，結(jié)合生理生化特性、菌落形態(tài)特征及菌株特異性序列分析等手段，確定其分類歸屬；并對其降解多菌靈的特性進行了研究。其主要研究結(jié)果如下：
　　 1.從長期施用多菌靈的保護地蔬菜田土壤中經(jīng)富集培養(yǎng)分離純化得到68個細菌菌株，反復(fù)測定其降解能力，最終得到一株降解多菌靈效果較好的細菌菌株CD09-13。該菌在30℃、200r/min、pH7.0的條件下培養(yǎng)3d，對濃度為100㎎/L的多菌靈

3、的降解率為85.89％。
　　 2.對菌株CD09-13主要生理生化特征進行分析，結(jié)果表明：菌株在PB培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)48h，形成圓形菌落，菌體紅色、黏性、光滑、突起、邊緣整齊、不透明、氣味難聞。100倍油鏡下觀察菌體呈短桿狀。革蘭氏染色陰性；菌株的接觸酶試驗、乙酸氧化試驗、產(chǎn)H2S試驗、明膠液化試驗陽性；淀粉水解試驗、V-P試驗、甲基紅試驗、吲哚試驗均為陰性；葡萄糖氧化發(fā)酵試驗結(jié)果為發(fā)酵型。該菌株的16S rDNA序列分析結(jié)果

4、表明，其與Serratia liquefaciens有較高的同源性（99％）。綜合菌株CD09-13的生理生化特性及16S rDNA系統(tǒng)進化分析結(jié)果，確定該菌為沙雷氏菌屬（Serratia）的液化沙雷菌（Serratia liquefaciens）。
　　 3.考察了培養(yǎng)溫度、pH值、接種量3個因素對菌株CD09-13降解能力的影響，以對多菌靈的降解率為指標，證明菌株CD09-13降解多菌靈的最適溫度為30℃，最適pH為7.0，

5、最適接種量為5％。
　　 4.采用單因素試驗與正交試驗相結(jié)合的方式對菌株CD09-13發(fā)酵培養(yǎng)基配方進行優(yōu)化，結(jié)果表明菌株在以葡萄糖為最佳碳源，蛋白胨為最佳氮源的培養(yǎng)基中菌體生長量最大；綜合考慮各因素對發(fā)酵液菌體生長量、多菌靈降解率以及經(jīng)濟方面的影響篩選出發(fā)酵條件的最優(yōu)組合為A1B1C1D2E2，即發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：葡萄糖5g，蛋白胨3g，NaCl1g，MgSO4·7H2O1g，K2HPO41.5g，蒸餾水1000ml。

6、　　 5.從長期施用多菌靈的保護地蔬菜田土壤中分離純化得到一株對多菌靈降解效果較好的真菌菌株CF-2。該菌在25℃、140rpm/min、pH7.0的條件下培養(yǎng)7d，對濃度為100㎎/L的多菌靈降解率為54.56％。
　　 6.菌株CF-2在PDA平板上培養(yǎng)一周，菌落粉白色，菌絲突起呈絮狀，白色質(zhì)密。鏡檢觀察，菌株產(chǎn)生兩種形狀、大小不同的孢子，大孢子鐮刀形多隔膜，小孢子橢圓形。測得菌株的5.8S rDNA-ITS區(qū)序列在NCB