廣西沼澤型水牛Leptin b型受體的克隆及其在腦垂體和卵巢中的分布.pdf

1、Leptin是一種與動物的能量開支、生殖和免疫的調(diào)節(jié)有關(guān)的多肽類激素，而其生物學(xué)功能是由leptin受體介導(dǎo)的，它在水牛體內(nèi)的作用部位以及相關(guān)研究資料十分有限。本研究的目的在于分析廣西沼澤型水牛leptin b型受體的基因克隆和序列分析，并檢查該受體在水牛腦垂體和卵巢組織中的分布。根據(jù)水牛leptin b型受體基因以及Genbank中水牛leptin b型受體基因和其他哺乳動物相似基因進(jìn)行分析。利用oligo軟件設(shè)計(jì)出一對擴(kuò)增水牛lep

2、tin b型受體基因保守區(qū)序列的引物。上游引物：5＇-GGTGCCAGCAACTACAGA-3＇；下游引物：5＇-GGGGACAACACTCTTGAC-3＇。然后以成年雌性廣西沼澤型水牛腦垂體總RNA為模板，通過RT-PCR法擴(kuò)增出長度為510bp的廣西沼澤型水牛leptin b型受體基因的保守序列。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)膠回收純化后，連接pMD18-T載體上進(jìn)行測序。測序結(jié)果顯示，經(jīng)核苷酸同源性比對該片段與印度水牛leptin b型受體基因同源性

3、為97.4％。為進(jìn)一步研究leptin b型受體基因的生物學(xué)功能提了供理論基礎(chǔ)。
　　 為leptin b型受體基因在水牛腦垂體組織和卵巢組織中定位，實(shí)驗(yàn)采用組織原位雜交技術(shù)，用擴(kuò)增得到的水牛leptin b犁受體基因序列為模板，制備出用于組織原位雜交的cDNA地高辛標(biāo)記探針。川制備好的leptin b型受體cDNA探針與成年廣西沼澤型水牛的卵巢組織，腦垂體組織石蠟切片進(jìn)行組織原位雜交并嚴(yán)格設(shè)立陰性空白對照組。結(jié)果發(fā)現(xiàn)lepti