基于RAPD和SRAP標(biāo)記的粵選系列匍匐翦股穎種質(zhì)資源多樣性研究.pdf

1、本研究以318份粵選系列匍匐翦股穎種質(zhì)資源為材料，通過田間篩選和分子特異性篩選相結(jié)合的方法，篩選出34份抗逆性較強(qiáng)的品種（品系）和30份特異性較強(qiáng)的輻射系材料。得到如下主要結(jié)果：
　　 ㈠基于RAPD分子標(biāo)記的34份田間篩選品種（品系）遺傳多樣性分析：⑴建立了一套適合翦股穎屬植物基因組DNA提取的方法，即改良CTAB法，其提取的DNA純度達(dá)到1.706～1.873；得率為107.992～165.733 ng/μg；⑵以單因子試驗(yàn)

2、優(yōu)化翦股穎屬植物RAPD-PCR反應(yīng)體系，得出20ul反應(yīng)體系最佳反應(yīng)濃度：Taq酶1U；primer0.5μM；DNA40ng；dNTPs0.375 mM；10×PCRbuffer2.0μL：MgCl22.5 mM；ddH2O12.05μL；⑶由RAPD標(biāo)記分析結(jié)果可知，從47條引物的擴(kuò)增結(jié)果中統(tǒng)計(jì)了424條清晰可分辨的條帶，其中有288條為多態(tài)性帶，平均多態(tài)性比率（P）為67.9％。用Shannon多樣性指數(shù)評價樣品遺傳多樣性結(jié)果表

3、明：平均多樣性指數(shù)（I）為0.3862，遺傳相似系數(shù)（H）為0.2414，觀察等位基因數(shù)（Na）和有效等位基因數(shù)（Ne）分別為2和1.3715，遺傳距離（GD）的范圍在0.0720～0.8986之間，這些由田間選育的抗性較強(qiáng)的翦股穎品系遺傳差異較為顯著，株型和抗逆性不一，但遺傳分化，遺傳多樣性較為狹窄，這可能是由輻射材料本身的缺陷導(dǎo)致的。
　　 ㈡基于SRAP分子標(biāo)記的160份輻射系材料遺傳突變多樣性分析：⑴利用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化翦

4、股穎屬植物SRAP-PCR體系，得出25ul反應(yīng)體系的最佳反應(yīng)濃度:10X buffer2.5ul、Mg2+1.25mmol/L、dNTPs0.24mmol/L_、primer0.20umol/L，Taq酶1U、DNA50ng。從72對引物組合中成功篩選出25對帶型清晰、亮度高、無雜帶的引物組合用于SRAP-PCR擴(kuò)增；⑵由SRAP標(biāo)記分析結(jié)果可知：從160份輻射系材料中成功篩選出30份特異性較強(qiáng)的品系作為多樣性分析材料，從25對引物對

5、擴(kuò)增結(jié)果中得到對引物的擴(kuò)增結(jié)果中得到419條擴(kuò)增片段，有232條具有多態(tài)性，平均多態(tài)性比率P（％）達(dá)到55.4％。平均多樣性指數(shù)（I）為0.4672，平均基因多樣性（He）為0.3040，觀察等位基因數(shù)（Na）和有效等位基因數(shù)（Ne）分別為2和1.5011，遺傳距離（GD）的范圍在0.0092～0.7793之間。每個輻射系內(nèi)部的突變率依次為：粵選1號輻射系<粵選3號新品系輻射系<粵選2號新品系輻射系。說明粵選2號新品系輻射系的內(nèi)部輻射突

6、變率較高，產(chǎn)生特異性的品種較多。Penncross與粵選1號輻射系、粵選2號新品系輻射系、粵選3號新品系輻射系的遺傳相似度依次為：粵選1號輻射系>粵選2號新品系輻射系>粵選3號新品系輻射系?；涍x1號國審品種出自Penncross也得到證明；⑶利用SRAP標(biāo)記構(gòu)建DNA指紋圖譜和進(jìn)行遺傳差異分析結(jié)果可知:17對引物對13份匍匐翦股穎品種（品系）進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增出184條清晰的條帶，其中有131條具有多態(tài)性，平均多態(tài)性條帶比率為71％。