黃瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性的分子標(biāo)記和細(xì)胞學(xué)研究.pdf

1、黃瓜（CucumissativusL.）是一種重要的蔬菜作物，在世界各地廣泛栽培。我國(guó)黃瓜種質(zhì)資源豐富，對(duì)黃瓜種質(zhì)資源進(jìn)行系統(tǒng)分析，對(duì)指導(dǎo)育種實(shí)際工作有著重要的理論價(jià)值。本文利用RAPD分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)不同生態(tài)型的黃瓜種質(zhì)資源進(jìn)行了遺傳多樣性和親緣關(guān)系分析，構(gòu)建了22個(gè)黃瓜品種的RAPD指紋圖譜；對(duì)4個(gè)不同生態(tài)型品種進(jìn)行了核型分析及遺傳多樣性研究并探討其遺傳變異規(guī)律，為進(jìn)一步挖掘黃瓜的種質(zhì)資源及新品種的選育提供理論依據(jù)；對(duì)酶解去壁低滲法制

2、片中酶解過(guò)程的相關(guān)因子進(jìn)行了研究，以確定最佳的酶解效果，以期為進(jìn)一步對(duì)黃瓜染色體進(jìn)行熒光原位雜交研究奠定基礎(chǔ)。
　　 1黃瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性的RAPD分析
　　 1.1黃瓜基因組DNARAPD-PCR反應(yīng)體系優(yōu)化
　　 以“滬雜6號(hào)”為試材，對(duì)影響RAPD-PCR反應(yīng)的主要因子-Mg2+濃度、dNTPs濃度、TaqDNA聚合酶用量和引物濃度進(jìn)行優(yōu)化，建立起適合黃瓜基因組DNA的RAPD反應(yīng)體系。結(jié)果表明：最適的

3、RAPD反應(yīng)體系（20μL）含模板DNA量30ng，Mg2+濃度2.0mmol/L，dNTPs濃度0.2mmol/L，TaqDNA聚合酶用量0.75U，引物濃度0.6mmol/L。
　　 1.2黃瓜品種RAPD指紋圖譜構(gòu)建及遺傳相似性分析
　　 以22個(gè)代表廣泛遺傳基礎(chǔ)的黃瓜品種為試材，利用RAPD技術(shù)對(duì)其進(jìn)行了指紋圖譜構(gòu)建及遺傳相似性分析。從240條RAPD隨機(jī)引物中篩選出27條具有穩(wěn)定多態(tài)性的引物。27條引物共擴(kuò)增出

4、163條帶譜，其中多態(tài)性帶70條，平均多態(tài)性比例為43.10％。9條RAPD引物產(chǎn)生的12個(gè)特異性標(biāo)記可以單一地鑒別9個(gè)品種，利用不同引物的組合可以將其他的品種鑒別開(kāi)來(lái)。通過(guò)UPGMA法進(jìn)行聚類分析，當(dāng)GSC=0.6888時(shí)，可將22個(gè)黃瓜品種分為四個(gè)群。22個(gè)品種間的平均遺傳相似系數(shù)為0.8004。
　　 2黃瓜種質(zhì)資源的核型分析
　　 以4個(gè)不同生態(tài)型的黃瓜品種為試材進(jìn)行了核型分析及比較，四個(gè)品種的核型公式分別為：北

5、京截頭2n=14=14m、滬雜6號(hào)2n=14=10m+4sm（2SAT）、Ec52n=14=14m、7011A2n=14=12m+2sm（2SAT）。其中滬雜6號(hào)、EC5、7011A的核型為首次報(bào)道。核型結(jié)果表明，北京截頭、滬雜6號(hào)和EC5三個(gè)品種的核型都是1A型，屬于對(duì)稱性核型；7011A的核型是2A型，屬于較對(duì)稱的核型。
　　 3黃瓜酶解去壁低滲法制片技術(shù)
　　 以寧佳3號(hào)種子為試材，對(duì)酶解去壁低滲法制片中的混合酶液