牙鲆腸弧菌密度感應(yīng)系統(tǒng)的研究及其信號(hào)分子降解菌株的篩選.pdf

1、密度感應(yīng)(Quorum Sensing)是細(xì)菌監(jiān)控自身群體密度的環(huán)境信號(hào)感受系統(tǒng)。細(xì)菌在繁殖過(guò)程中分泌一些特定的化學(xué)信號(hào)分子，這種信號(hào)分子從胞內(nèi)擴(kuò)散到胞外，當(dāng)這種信號(hào)分子達(dá)到一定的閾值時(shí)，細(xì)菌感受到自身的細(xì)胞密度，啟動(dòng)某些基因的表達(dá)，這一過(guò)程稱為密度感應(yīng)。目前，已在許多革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌中發(fā)現(xiàn)了密度感應(yīng)系統(tǒng)，并調(diào)控許多基因的表達(dá)。已有研究證實(shí)了一些病原性弧菌通過(guò)自身復(fù)雜的密度感應(yīng)系統(tǒng)來(lái)調(diào)控致病因子的表達(dá)。
　　 本研究使用了報(bào)

2、告菌株根癌農(nóng)桿菌KYC55(pJZ372)(pJZ384)(pJZ410)，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)牙鲆腸弧菌DA3有三種不同的?；呓z氨酸內(nèi)酯類自誘導(dǎo)分子(acyl-homoserine lactone，AHLs)。由于這三種AHL信號(hào)分子不可以被報(bào)告菌株紫色桿菌CV026檢測(cè)出來(lái)，我們推測(cè)它們可能有著較長(zhǎng)的N-?；鶄?cè)鏈或者特殊的側(cè)鏈基團(tuán)，例如羥基側(cè)鏈基團(tuán)。它們的結(jié)構(gòu)性質(zhì)目前仍舊未知，需要通過(guò)HPLC-MS分析進(jìn)行更進(jìn)一步的研究。DA3在整個(gè)生長(zhǎng)階段

3、都產(chǎn)生AHL信號(hào)分子，其活性隨著細(xì)菌的密度增加而增強(qiáng)。DA3也可產(chǎn)生AI-2類自誘導(dǎo)分子(autoinducer-2，AI-2)；AI-2信號(hào)分子在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期開(kāi)始積累并迅速達(dá)到一定的活性水平，并且保持在這一較高的活性水平直到細(xì)菌生長(zhǎng)的穩(wěn)定期。本研究進(jìn)一步克隆了DA3 luxS基因的全長(zhǎng)序列并發(fā)現(xiàn)其與大菱鲆弧菌的luxS基因有99.6％的相似性。luxS基因突變株M-2喪失產(chǎn)生AI-2信號(hào)分子的能力，生長(zhǎng)率和生物膜的產(chǎn)生均未受到影響，且未

4、顯著影響牙鲆腸弧菌的致病性。所有數(shù)據(jù)表明，luxS基因與牙鲆腸弧菌的致病性沒(méi)有直接的調(diào)控關(guān)系，或者牙鲆腸弧菌的致病性是由其它不同的密度感應(yīng)系統(tǒng)協(xié)同調(diào)控，僅失去luxS基因的調(diào)控并不能降低其致病性。牙鲆腸弧菌DA3與其標(biāo)準(zhǔn)菌株LMG19664T都不產(chǎn)生霍亂弧菌Ⅰ類自體誘導(dǎo)分子(cholerae autoinducer-1, CAI-1)。
　　 已報(bào)道AHL介導(dǎo)的密度感應(yīng)系統(tǒng)存在參與弧菌病原菌毒力的調(diào)控，如哈維氏弧菌，鰻弧菌等，因