口服人參莖葉皂甙對雞的疫苗免疫增強作用的研究.pdf

1、動物傳染病給養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟損失，是人們普遍關(guān)注的問題。雖然疫苗免疫接種是防治動物傳染病的一個重要手段，但在很多情況下動物接種疫苗后不能產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答。為了提高疫苗免疫效果，常在疫苗中添加佐劑。迄今，已有100多種物質(zhì)被報道有佐劑作用，從中藥人參(Panax ginseng C.A.Meyer)干燥根中提取的皂甙成分人參皂甙(GS)是其中之一。前期研究亦表明，GS對豬細(xì)小病毒病疫苗、豬丹毒菌疫苗和奶牛金黃色葡萄球菌疫苗均有具有免

2、疫佐劑作用。但是GS成本較高，難以在畜牧業(yè)生產(chǎn)上推廣應(yīng)用?；瘜W(xué)分析表明，人參的莖、葉、花蕾和果實等地上部分中亦含有與人參根中相似的皂甙類成分，并且人參莖葉中皂甙(ginseng stem-and-leaf saponins，GSLS)含量明顯高于人參根中皂甙的含量。藥理試驗表明，GSLS與人參根皂甙(GS)具有相似的藥理作用。GSLS價格相對低廉，因而開發(fā)利用研究人參地上部位來源的皂甙成分，尤其是GSLS具有更高的經(jīng)濟價值。本論文通過研

3、究口服GSLS對于雞免疫新城疫弱毒疫苗的免疫效果，確定出合理的給藥方法。在此基礎(chǔ)上研究口服GSLS對新城疫和禽流感滅活疫苗的免疫效果。論文還從體液免疫、細(xì)胞免疫和黏膜免疫角度探討口服GSLS對雞免疫增強作用的機制，從而為養(yǎng)雞生產(chǎn)上推廣應(yīng)用GSLS提供依據(jù)。
　　 試驗一、口服不同劑量GSLS對雞滴鼻免疫新城疫弱毒苗引起的抗體水平的影響
　　 目的研究口服不同劑量GSLS對雞滴鼻免疫新城疫弱毒(NDV)苗后其抗體水平的影響

4、，觀察其量效關(guān)系，確定口服GSLS的有效劑量范圍。方法健康1日齡海蘭蛋公雛84只，隨機分為6組，每組14只。組1～4，在疫苗免疫前口服不同劑量的GSLS(2.5、5、10、20 mg/kg BW)，飲水給藥，連用3天；組5，免疫前口服10 mg/kg BW的鹽酸左旋咪唑，飲水給藥，連用3天；組6，免疫前不給藥。在第14和28日齡給雞滴鼻接種雞新城疫Ⅳ系弱毒苗(LaSota株)。分別于免疫前和免疫后7、14、21、28和35天給動物稱重、

5、采血，分離血清，檢測血清中血凝抑制效價(HI)。結(jié)果和結(jié)論與對照組相比，口服5 mg/kg BW GSLS可顯著增強雞血清NDV特異性HI效價(P<0.01)，而口服左旋咪唑雖然在數(shù)值上增加了HI效價，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。因此，在以后試驗中選擇5 mg/kg BW的GSLS給藥劑量。
　　 試驗二、口服不同天數(shù)GSLS對雞滴鼻免疫新城疫疫苗引起的抗體水平的影響
　　 目的研究口服不同天數(shù)GSLS對雞滴鼻免疫新

6、城疫疫苗后其抗體水平的影響，觀察其時效關(guān)系，確定口服GSLS的最佳天數(shù)。方法健康1日齡海蘭蛋公雛120只，隨機分為6組，每組20只。組1-3，在疫苗免疫前分別飲水給藥GSLS3、5、7天，劑量為5 mg/kg BW；組4，疫苗免疫前飲水口服鹽酸左旋咪唑3天，劑量為10 mg/kgBW；組5，免疫前不給藥，組6，不免疫也不給藥。免疫方法與試驗一相同。分別于免疫前和免疫后7、14、21、28和35天，采血，分離血清，檢測血清中HI效價。結(jié)果

7、和結(jié)論與對照組相比，口服不同天數(shù)GSLS均可顯著增強雞血清NDV特異性HI效價(P<0.05或P<0.01)，不同給藥天數(shù)增強HI效價的水平從高到低依次為：7天>5天>3天。因此，后來我們選擇飲水口服GSLS7天，劑量為5mg/kg BW進行試驗。
　　 試驗三、免疫前、后口服GSLS對雞滴鼻免疫新城疫疫苗引起的免疫反應(yīng)的影響
　　 目的研究免疫前、后口服GSLS對雞滴鼻免疫新城疫疫苗引起的免疫反應(yīng)的影響，從而確定口服G

8、SLS最佳給藥時間，并探討口服GSLS免疫增強作用的機制。方法健康1日齡海蘭蛋公雛88只，隨機分為4組，每組22只。組1～2，在免疫前或者免疫后飲水口服GSLS7天，劑量為5mg/kg BW；組3，免疫但不給藥，組4，不免疫也不給藥。疫苗免疫方法同試驗一。分別于免疫前和免疫后7、14、21、28和35天，采血，分離血清，檢測血清HI效價。并于二免后2周和4周，處死雞后取脾臟，分離脾淋巴細(xì)胞，用MTT法檢測淋巴細(xì)胞增殖情況。二免后4周，取

9、雞十二指腸和空腸置中性甲醛溶液固定，采用免疫組化(IHC)及H.E.染色檢測雞小腸中IgA陽性細(xì)胞面積和腸內(nèi)皮淋巴細(xì)胞(iIEL)數(shù)目。結(jié)果和結(jié)論與對照組相比，免疫前口服GSLS可顯著增強雞的血清HI效價，脾臟淋巴細(xì)胞對NDV的刺激指數(shù)，小腸IgA陽性細(xì)胞面積和小腸絨毛中iIEL，的數(shù)目(P<0.05或P<0.01)；并且免疫前口服GSLS試驗組在血清HI效價、脾臟淋巴細(xì)胞對NDV的刺激指數(shù)和小腸絨毛中iIEL的數(shù)目等多項指標(biāo)上，要顯著

10、高于免疫后口服GSLS試驗組(P<0.05)。因此，本試驗結(jié)果表明免疫前口服GSLS對雞的增強免疫效果要優(yōu)于免疫后給藥。免疫前口服GSLS不僅可以提高機體全身免疫功能，還可促進局部黏膜免疫功能。
　　 試驗四、口服GSLS對雞免疫新城疫滅活疫苗后抗體水平的影響
　　 目的評價飲水口服GSLS對雞免疫雞新城疫滅活疫苗后抗體水平的影響。方法健康1日齡海蘭蛋公雛50只，隨機分為2組，每組25只。組1，在免疫前連續(xù)飲水口服GSL

11、S7天，劑量為5 mg/kg BW；組2，免疫但不給藥，為對照組。兩組雞在第14和35日齡進行胸肌注射接種雞新城疫滅活疫苗(LaSota株)。于免疫前和免疫后7、14、21、28、35、42和49天采血，分離血清，檢測血清HI效價。結(jié)果與結(jié)論與對照組相比，免疫前口服GSLS可顯著增強雞血清HI效價(P<0.05或P<0.01)，表明免疫前口服GSLS對雞ND滅活疫苗免疫具有增強作用。
　　 試驗五、口服GSLS對雞免疫禽流感滅活

12、疫苗引起的抗體水平的影響
　　 目的評價飲水口服GSLS對雞免疫雞禽流感滅活疫苗后抗體水平的影響。方法健康28日齡海蘭蛋雞7500只，隨機分為2組，每組3750只。組1，在免疫前連續(xù)飲水口服GSLS7天，劑量為5 mg/kg BW；組2，免疫但不給藥，為對照組；兩組雞于第35日齡頸部皮下注射雞禽流感滅活疫苗(H5N1亞型)。于免疫前和免疫后2、9、16、23、49、56和63天，每組隨機對45只雞采血，分離血清，檢測血清特異性H

13、I效價。結(jié)果與結(jié)論與對照組相比，免疫前飲水口服GSLS均可顯著增強雞血清特異性HI效價(P<0.05或P<0.01)，表明免疫前口服GSLS對雞免疫禽流感滅活疫苗同樣具有免疫增強作用。
　　 綜上所述，飲水口服GSLS對雞免疫雞新城疫弱毒疫苗、雞新城疫滅活疫苗和禽流感滅活疫苗均具有免疫增強作用。給雞飲水口服GSLS(5 mg/kg BW)7天可顯著提高雞疫苗免疫后血清特異性HI效價、脾臟淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)、小腸IgA陽性細(xì)胞面積及