糖皮質(zhì)激素對肉仔雞骨骼肌葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)的影響.pdf

1、為探討糖皮質(zhì)激素對肉仔雞骨骼肌葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)的影響，本研究從活體入手，以外源導(dǎo)入糖皮質(zhì)激素的方法，觀察肉仔雞骨骼肌內(nèi)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)載體的種類和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)載體的變化情況；同時(shí)，以體外培養(yǎng)的成肌細(xì)胞為研究模型，分析引起葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)改變的因素并測定葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)速率，為肉仔雞骨骼肌葡萄糖代謝紊亂和胰島素抵抗的發(fā)生提供一定的理論依據(jù)。
　　 選取0日齡體重相近的Arbor Acres 雄性肉雞72 只，隨機(jī)分為三個(gè)處理：地塞米松組（DEX）、對照組

2、（NC）和采食量配對組（PF）。7-13日齡，各組早8:00分別腹部皮下注射DEX或生理鹽水2mg/Kg。對照組與地塞米松組自由采食飲水，采食量配對組飼喂DEX組前一天的采食量。13日齡晚8:00 各處理空腹12小時(shí)，自由飲水后取樣。翅靜脈采血，分離血漿，冷凍保存；臀股二頭肌（M1.Biceps femoris，BF）、胸大肌（M1.
　　 Pectoralis major，PM）各2g 左右，液氮速凍，-80℃貯存。取全部胸腿

3、肌稱重，測定胸腿肌指數(shù)。結(jié)果表明，生產(chǎn)性能方面，處理7天后體重顯著降低，料重比顯著升高，表明糖皮質(zhì)激素處理降低了肉仔雞的生產(chǎn)性能，胸腿肌指數(shù)變化不顯著；血液生化指標(biāo)方面，處理7天后血漿尿酸、胰島素和血糖含量顯著上升；在對基因mRNA的檢測中，肉仔雞骨骼肌中發(fā)現(xiàn)GLUT1、GLUT3、GLUT8、GLUT11 與GLUT12蛋白的存在，同時(shí)并未發(fā)現(xiàn)GLUT4 類似蛋白的存在。
　　 試驗(yàn)二，成肌細(xì)胞正常培養(yǎng),72h后去除胎牛血清，

4、無血清培養(yǎng)4h。（1）隨機(jī)分為4組：對照組（高糖無血清）、LY294002組（50uM LY294002）、Rapamycin組（5nMRapamycin）、地塞米松組（高糖無血清），1h后，后三組添加200nM DEX,3h后測定葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)速率。（2）隨機(jī)分為4組：對照組、胰島素組（高糖無血清）、RU486組（2uMRU486）、胰島素和地塞米松組（高糖無血清），1h后，后三組分別添加0.1U/ml INS 或200nM DEX+0.

5、1U/ml INS。3h后測定葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)速率。結(jié)果表明，（1）糖皮質(zhì)激素顯著降低了2-DG的轉(zhuǎn)運(yùn)速率，PI3K及mTOR 被阻斷后緩解了該抑制作用。（2）胰島素促進(jìn)了2-DG的攝取，加入地塞米松后消除了胰島素對2-DG 攝取的促進(jìn)作用，但差異并不顯著。
　　 試驗(yàn)三，成肌細(xì)胞于DMEM 高糖培養(yǎng)液中添加10％胎牛血清,37℃，5％ CO2正常培養(yǎng),72h后去除胎牛血清，無血清培養(yǎng)4h。（1）隨機(jī)分為5組：對照組，后四組分別添加0

6、.2、1、5、25 U/ml的INS。處理3h，提取RNA。（2）隨機(jī)分為4組：對照組、地塞米松組（200nM DEX）、胰島素組（0.1U/ml INS）；胰島素與地塞米松組（200nM DEX，0.1U/ml INS）。處理12h，提取RNA。結(jié)果表明，（1）隨著胰島素濃度的升高，GLUT1，IR mRNA的相對表達(dá)量皆存在升高又降低的趨勢，0.2 U/ml 時(shí)表達(dá)量最高，隨后降低（2）
　　 只有GLUT1的mRNA 水平

7、受到胰島素處理后顯著升高，表現(xiàn)出胰島素敏感的特性。揭示GLUT1 在肉仔雞骨骼肌胰島素誘導(dǎo)的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)的重要作用。
　　 試驗(yàn)四，成肌細(xì)胞正常培養(yǎng),72h后去除胎牛血清，無血清培養(yǎng)4h。（1）隨機(jī)分為2組：高糖組（4.5 g/L GLU）、對照組（1 g/L GLU）。處理12h，提取RNA。（2）隨機(jī)分為2組：無糖組（0 g/L GLU），對照組（1 g/L GLU）。處理12h，提取RNA。結(jié)果表明，（1）高糖處理顯著升高了

8、GLUT1、GLUT3的mRNA 水平。對其它幾種轉(zhuǎn)運(yùn)載體mRNA 水平無顯著影響。（2）無糖處理對所有五個(gè)蛋白的mRNA 水平無顯著影響，其中GLUT11 與GLUT12表達(dá)量非常低。由以上結(jié)果顯示GLUT1、GLUT3 在肉仔雞骨骼肌中可能受到血糖水平的調(diào)控。
　　 綜上所述，肉仔雞骨骼肌中GLUT1 所表現(xiàn)的胰島素敏感的特性及在糖皮質(zhì)激素處理下含量的降低，可能在由糖皮質(zhì)激素處理所導(dǎo)致的肉仔雞葡萄糖代謝的紊亂中起到了重要作用