丹參葉片不定芽的誘導(dǎo)及其成苗中丹酚酸B含量的測定.pdf

1、本研究以四川中江主栽丹參品種小葉型丹參(S. miltiorrhiza Bge. cv.foliolum)和野生型丹參(S. miltiorrhiza Bge. cv. silcestris)為材料，建立起無菌繁殖體系，并從中取得葉片進(jìn)行離體培養(yǎng)，通過正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)選擇不同培養(yǎng)基和添加不同外源激素，篩選出丹參葉片不定芽再生的最適條件；然后采用完全隨機(jī)二因素有重復(fù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，篩選出丹參葉片不定芽芽苗的最適生根條件。并在選出的最佳培養(yǎng)基上添加不

2、同濃度的AgNO3，觀察葉片在誘導(dǎo)、分化過程中的外觀形態(tài)變化，分析不同濃度的AgNO3對野生型丹參葉片不定芽再生過程的影響。同時(shí)，采用HPLC，以丹參藥材(根)以及田間栽培大葉型丹參(S.miltiorrhiza Bge.cv. sativa)和小葉型丹參(S. miltiorrhiza Bge. cv. foliolum)地下部分(根)和地上部分(莖段和葉片)為對照，測定小葉型丹參葉片不定芽誘導(dǎo)出的成苗中丹酚酸B的含量，分析葉片離體培

3、養(yǎng)過程對小葉型丹參丹酚酸B含量的影響，對比了大葉型丹參和小葉型丹參植株不同部位中丹酚酸B含量的差異。并就不同濃度的甲醇溶液對丹酚酸B提取的影響進(jìn)行了研究。試驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 (1)利用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)篩選小葉型丹參和野生型丹參不定芽誘導(dǎo)最適培養(yǎng)條件，通過不定芽再生率、平均每葉塊再生芽數(shù)以及再生力三個(gè)指標(biāo)分析表明：
　　 小葉型丹參最適培養(yǎng)條件為MS+NAA0.3mg·L-1+6-BA1.5mg·L-1，不定芽誘導(dǎo)率達(dá)到63

4、.33％。
　　 野生型丹參最適培養(yǎng)條件為NN69+NAA0.2mg·L-1+6-BA2.0mg·L-1，不定芽誘導(dǎo)率達(dá)到73.33％。
　　 (2)采用完全隨機(jī)二因素有重復(fù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)篩選丹參葉片不定芽芽苗最適生根條件，通過生根率、平均根數(shù)、平均根長、平均株根鮮重和平均株根干重五個(gè)指標(biāo)分析表明：
　　 小葉型丹參和野生型丹參最適生根條件均為1/2MS+IBA0.1mg·L-1，生根率分別達(dá)到86.16％和90.20

5、％。
　　 (3)3.0mg.L-1AgNO3促進(jìn)野生型丹參葉片不定芽再生的效果最明顯，其不定芽再生率和再生力均最高，分別為95.56％和246.49。同時(shí)，葉片出芽時(shí)間較葉片在不添加AgNO3的培養(yǎng)基上的時(shí)間提前了，并且不定芽發(fā)生途徑由間接發(fā)生途徑為主轉(zhuǎn)變?yōu)橹苯影l(fā)生途徑為主。
　　 (4)采用HPLC，以丹參藥材(根)以及田間栽培丹參地下部分(根)和地上部分(莖段和葉片)為對照，測定小葉型丹參葉片不定芽誘導(dǎo)出的成苗中丹

6、酚酸B的含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：
　　 小葉型丹參經(jīng)B5+NAA0.3mg·L-1+6-BA1.0mg·L-1所得的芽苗丹酚酸B的含量最高，為0.3176mg·g-1。高于田間栽培小葉型丹參和大葉型丹參植株地上部分中丹酚酸B的含量，分別為0.2170mg·g-1和0.1416mg·g-1。低于丹參藥材中丹酚酸B的含量。但是，綜合考慮丹參葉片的不定芽再生率、每葉不定芽數(shù)(即再生力)和丹酚酸B的含量認(rèn)為，MS+NAA0.3mg·L-1+6-

7、BA1.5mg·L-1為小葉型丹參葉片不定芽誘導(dǎo)和丹酚酸B合成的最適培養(yǎng)基。
　　 同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，小葉型丹參地上部分和根中丹酚酸B的含量均分別高于大葉型丹參地上部分和根中丹酚酸B的含量，其含量分別為0.2170mg·g-1，34.8371mg·g-1和0.1416mg·g-1,19.5881mg·g-1。
　　 (5)精密量取75％甲醇溶液50.0mL，置具塞錐形瓶中，密塞，稱定重量，加熱回流1h為提取大葉型丹參地上部分丹