海洋微藻的分離、無(wú)菌化和異養(yǎng)培養(yǎng).pdf

1、為了得到無(wú)菌藻株并進(jìn)行異養(yǎng)實(shí)驗(yàn),本實(shí)驗(yàn)采用抗生素法對(duì)小球藻C95(Chlorella sp.),三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)和球等鞭金藻8701(Isochrysis galbana)三種微藻進(jìn)行了無(wú)菌化實(shí)驗(yàn)。研究選取了卡那霉素(kanamycin)、鏈霉素(streptomycin)、新霉素(neomycin)、青霉素(penicillin)和慶大霉素(gentamycin)五種抗生素,在終濃度10

2、0 mg/L、200 mg/L、400 mg/L時(shí)分別對(duì)三種藻進(jìn)行了抗生素敏感性分析,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明五種抗生素均對(duì)小球藻C95產(chǎn)生了不同程度的抑制;除鏈霉素外,其它四種抗生素對(duì)三角褐指藻均有一定程度的促進(jìn)作用;球等鞭金藻8701對(duì)五種抗生素敏感性變化較大,鏈霉素在低濃度時(shí)有明顯促進(jìn)作用(P＜0.01),卡那霉素幾乎沒(méi)有任何影響,其它三種抗生素在高濃度時(shí)均有不同程度的抑制作用。
　　 從小球藻C95、三角褐指藻和球等鞭金藻8701中

3、分別分離出5株、5株和3株細(xì)菌菌株,分別標(biāo)記為A1-A5、B1-B5和C1-C3,并進(jìn)行了抗生素的抑菌效果實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明在小球藻中只有新霉素在高濃度時(shí)可以很好的抑制A4,但同時(shí)新霉素對(duì)A1無(wú)效,其它四種抗生素均能有效抑制除A4菌株外的其他菌株。三角褐指藻中卡那霉素能有效抑制B4菌株,但對(duì)B3無(wú)效,新霉素可以有效抑制4株細(xì)菌,其它3種抗生素只能有效抑制3株細(xì)菌。球等鞭金藻8701中的C3僅在高濃度的新霉素中才能被有效抑制,但新霉素對(duì)C1無(wú)

4、效,慶大霉素對(duì)3株細(xì)菌均不能有效抑制,卡那霉素僅抑制C1,鏈霉素和青霉素可有效抑制C1和C2。
　　 結(jié)合抑菌效果,針對(duì)每株藻設(shè)計(jì)出兩組抗生素組合進(jìn)行無(wú)菌化實(shí)驗(yàn),每組三種抗生素,分三次加入。結(jié)果表明該組合可以抑制大部分細(xì)菌,但不能完全殺滅。根據(jù)此實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)下一步實(shí)驗(yàn)進(jìn)行調(diào)整。采用重新設(shè)計(jì)抗生素組合,或在f/2異養(yǎng)培養(yǎng)基上追加相同抗生素組合,或傳代追加三次抗生素組合,用這三種方法進(jìn)一步對(duì)藻株進(jìn)行無(wú)菌化培養(yǎng)。結(jié)果表明,重新設(shè)計(jì)的抗生

5、素組合及f/2異養(yǎng)培養(yǎng)基上追加抗生素使小球藻C95達(dá)到了無(wú)菌化的效果,而追加抗生素組合實(shí)驗(yàn)中的細(xì)菌未減反增。進(jìn)一步對(duì)無(wú)菌化小球藻C95在兩種異養(yǎng)培養(yǎng)基上進(jìn)行了異養(yǎng)馴化。經(jīng)過(guò)20天的馴化,小球藻C95可進(jìn)行異養(yǎng)培養(yǎng)。且在兩種異養(yǎng)培養(yǎng)基中,小球藻C95的生長(zhǎng)差別較大,表明培養(yǎng)基是影響異養(yǎng)培養(yǎng)的一個(gè)重要因素。
　　 本研究同時(shí)還分別從青島和海南兩地采集水樣并采用平板法進(jìn)行了微藻的分離,共分離得到24株微藻。采用干重法對(duì)其中20株微藻進(jìn)