海洋微藻的分離、無菌化和異養(yǎng)培養(yǎng).pdf

1、為了得到無菌藻株并進行異養(yǎng)實驗,本實驗采用抗生素法對小球藻C95(Chlorella sp.),三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)和球等鞭金藻8701(Isochrysis galbana)三種微藻進行了無菌化實驗。研究選取了卡那霉素(kanamycin)、鏈霉素(streptomycin)、新霉素(neomycin)、青霉素(penicillin)和慶大霉素(gentamycin)五種抗生素,在終濃度10

2、0 mg/L、200 mg/L、400 mg/L時分別對三種藻進行了抗生素敏感性分析,實驗結(jié)果表明五種抗生素均對小球藻C95產(chǎn)生了不同程度的抑制;除鏈霉素外,其它四種抗生素對三角褐指藻均有一定程度的促進作用;球等鞭金藻8701對五種抗生素敏感性變化較大,鏈霉素在低濃度時有明顯促進作用(P＜0.01),卡那霉素幾乎沒有任何影響,其它三種抗生素在高濃度時均有不同程度的抑制作用。
　　 從小球藻C95、三角褐指藻和球等鞭金藻8701中

3、分別分離出5株、5株和3株細菌菌株,分別標記為A1-A5、B1-B5和C1-C3,并進行了抗生素的抑菌效果實驗。結(jié)果表明在小球藻中只有新霉素在高濃度時可以很好的抑制A4,但同時新霉素對A1無效,其它四種抗生素均能有效抑制除A4菌株外的其他菌株。三角褐指藻中卡那霉素能有效抑制B4菌株,但對B3無效,新霉素可以有效抑制4株細菌,其它3種抗生素只能有效抑制3株細菌。球等鞭金藻8701中的C3僅在高濃度的新霉素中才能被有效抑制,但新霉素對C1無

4、效,慶大霉素對3株細菌均不能有效抑制,卡那霉素僅抑制C1,鏈霉素和青霉素可有效抑制C1和C2。
　　 結(jié)合抑菌效果,針對每株藻設計出兩組抗生素組合進行無菌化實驗,每組三種抗生素,分三次加入。結(jié)果表明該組合可以抑制大部分細菌,但不能完全殺滅。根據(jù)此實驗結(jié)果對下一步實驗進行調(diào)整。采用重新設計抗生素組合,或在f/2異養(yǎng)培養(yǎng)基上追加相同抗生素組合,或傳代追加三次抗生素組合,用這三種方法進一步對藻株進行無菌化培養(yǎng)。結(jié)果表明,重新設計的抗生

5、素組合及f/2異養(yǎng)培養(yǎng)基上追加抗生素使小球藻C95達到了無菌化的效果,而追加抗生素組合實驗中的細菌未減反增。進一步對無菌化小球藻C95在兩種異養(yǎng)培養(yǎng)基上進行了異養(yǎng)馴化。經(jīng)過20天的馴化,小球藻C95可進行異養(yǎng)培養(yǎng)。且在兩種異養(yǎng)培養(yǎng)基中,小球藻C95的生長差別較大,表明培養(yǎng)基是影響異養(yǎng)培養(yǎng)的一個重要因素。
　　 本研究同時還分別從青島和海南兩地采集水樣并采用平板法進行了微藻的分離,共分離得到24株微藻。采用干重法對其中20株微藻進