番茄抗病基因Ty-1的分子標(biāo)記及其在輔助選擇中的應(yīng)用.pdf

1、番茄黃化卷葉病毒病是近年來(lái)在番茄生產(chǎn)上發(fā)生的一種毀滅性病害，Ty-1基因是最早發(fā)現(xiàn)的抗病基因。本研究以番茄黃化卷葉病毒抗病雜合體(Ty-1/ty-1)、抗病純合體(Ty-1/ty-1)和感病純合體(Ty-1/ty-1)為實(shí)驗(yàn)材料，根據(jù)已發(fā)表的與Ty-1緊密連鎖的RFLP標(biāo)記設(shè)計(jì)特異引物，經(jīng)PCR擴(kuò)增獲得目的片段，然后利用相應(yīng)的限制性?xún)?nèi)切酶進(jìn)行酶切反應(yīng)，篩選獲得了兩個(gè)與抗病基因Ty-1緊密連鎖的CAPS標(biāo)記TG97和Mi23，這兩個(gè)標(biāo)記都

2、可以區(qū)別抗病雜合和抗病純合基因型材料，是共顯性CAPS標(biāo)記。
　　 (1)TG97 CAPS標(biāo)記：在經(jīng)PCR擴(kuò)增和酶切后，抗病純合基因型材料出現(xiàn)398 bp、303 bp和95 bp三個(gè)特異片段；抗病純合基因型材料出現(xiàn)303 bp和95 bp兩個(gè)特異片段；而感病純合基因型的只出現(xiàn)398 bp的片段。其引物序列為T(mén)G97 F：5’-TAA TCC GTC GTT ACC TCT CCT T-3’、TG97 R：5’-CGG ATG

3、 ACT TCA ATAGCAATGA-3’，使用的限制性?xún)?nèi)切酶為T(mén)aq I。(2)Mi23 CAPS標(biāo)記：在經(jīng)PCR擴(kuò)增和酶切后抗病雜合基因型材料得到402 bp和354 bp兩個(gè)特異片段；抗病純合基因型材料得到402 bp的片段；感病純合基因型材料得到354 bp的特異片段。其引物序列為Mi23 F：5’-TGG AAA AAT GTT GAA TTT CTT TTG-3’、Mi23 R：5’-GCATAC TAT ATG GCT

4、TGT TTA CCC-3’，使用的限制性?xún)?nèi)切酶為Rsal。
　　 以15種不同來(lái)源和不同遺傳背景的番茄為實(shí)驗(yàn)材料，對(duì)CAPS標(biāo)記。TG97和Mi23進(jìn)行了驗(yàn)證。得到的結(jié)果證明這兩個(gè)CAPS標(biāo)記穩(wěn)定、可靠，有效性高。綜合比較發(fā)現(xiàn)，TG97 CAPS標(biāo)記更加清晰和容易辨認(rèn)，是一個(gè)比較理想的共顯性標(biāo)記。
　　 利用共顯性CAPS標(biāo)記TG97和Mi23，在苗期對(duì)番茄F2代分離群體進(jìn)行輔助選擇，獲得了10個(gè)抗病基因純合型的單株，

5、其編號(hào)分別為15、20、32、33、35、36、41、43、49和58。將這10個(gè)單株種植于田間自交留種，繼而對(duì)F3株系的抗病性和經(jīng)濟(jì)性狀進(jìn)行調(diào)查，初步選出優(yōu)良的株系3個(gè)，即：33-1、35-1和43-1。株系33-1為無(wú)限生長(zhǎng)型、紅果、單果重160-180g、坐果率高；株系35-1為無(wú)限生長(zhǎng)型、紅果、單果重130-150g、較硬；株系43-1為無(wú)限生長(zhǎng)型、紅果、單果重110-120g、較硬、商品性好。
　　 篩選獲得的與抗病基