利用PCR-RFLP技術(shù)鑒定部分沙梨（Pyrus pyrifolia Nakai）品種S基因型.pdf

1、梨是世界及我國主栽果樹之一，絕大多數(shù)品種自花授粉不能結(jié)實(shí)，相同S基因型品種間異花授粉也不能結(jié)實(shí)，在生產(chǎn)上必須合理配置授粉樹才能獲得目標(biāo)產(chǎn)量和果實(shí)品質(zhì)。自交不親和S基因型的確定，對于沙梨授粉品種選擇及其育種親本選配具有重要意義。然而，中國沙梨品種的S基因型鑒定卻很少報(bào)道。利用S基因特異性PCR－RFLP技術(shù)，對23個(gè)沙梨品種的S基因型進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明： 1．采用CTAB法提取的沙梨基因組總DNA，大部分OD<,260>／OD<

2、,280>在1.8左右，產(chǎn)率在200μg／g鮮重葉片以上，RNA去除干凈，DNA無降解，能夠用于本試驗(yàn)的后續(xù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)分析； 2．5個(gè)S基因型已知的日本沙梨品種，其鑒定結(jié)果與已知相符； 3．采用S基因特異性PCR－RFLP技術(shù)鑒定了18個(gè)未知S基因型沙梨品種的S基因型，其結(jié)果如下：金水1號(hào)（S<,7>S<,x>）、金水2號(hào)（S<,3>S<,y>）、江島（S<,5>S<,8>）、華梨1號(hào)（S<,1>S<,3>）、湘南（

3、S<,1>S<,3>）、翠冠（S<,1>S<,4>S<,5>）、杭青（S<,3>S<,7>）、西子綠（S<,1>S<,4>）、新杭（S<,1>S<,3>）、清香（S<,3>S<,7>）、三花（S<,7>S<,z>）、黃蜜（今村夏）（S<,1>S<,6>）、黃花（S<,1>S<,2>）、二宮白（S<,3>S<,w>）、華梨2號(hào)（S<,3>S<,4>）、寶珠梨（S<,7>S<,a>）、蒼溪雪梨（S<,5>S<,b>）、灌陽雪梨（S<,7>S

4、<,c>）； 4．通過親本S基因型分析，9個(gè)中國雜交沙梨品種，除華梨1號(hào)外，其余8個(gè)通過PCR－RFLP鑒定的S基因型均與親本S基因型相符；所鑒定的華梨1號(hào)S基因型與其母本湘南同為S<,1>S<,3>，田間授粉試驗(yàn)結(jié)果也證明其異交不親和； 5．通過F<,1>代S基因型分析，初步確定三花S<,z>為S<,2>，則三花S基因型為S<,2>S<,7>； 6．田間授粉試驗(yàn)結(jié)果表明，S基因型相同的華梨2號(hào)（S<,3>S<,

5、4>）與新世紀(jì)（S<,3>S<,4>）異交，表現(xiàn)為不親和，說明利用PCR－RFLP鑒定中國沙梨品種S基因型是準(zhǔn)確可行的，通過本試驗(yàn)鑒定的華梨2號(hào)S基因型是正確的； 7．通過田間授粉試驗(yàn)對蒼溪雪梨和灌陽雪梨的自交親和性進(jìn)行了檢測，結(jié)果表明，蒼溪雪梨自交花朵座果率為0％，灌陽雪梨為8.3％，在生產(chǎn)上均認(rèn)為是自交不親和；對于蒼溪雪梨和灌陽雪梨，人工授粉花朵座果率顯著高于自然授粉，人工授粉可顯著提高蒼溪雪梨和灌陽雪梨座果率； 8

6、．對S<,y>、S<,a>、S<,b>及S<,c>進(jìn)行了克隆、測序及序列分析，發(fā)現(xiàn)S<,y>與趙縣大鴨梨S<,21>基因?yàn)橥籗基因；S<,a>與雜交梨檸檬黃品種S<,33>基因?yàn)橥籗基因；S<,b>及S<,c>則為兩個(gè)新的S基因，繼西洋梨．S<,37>之后分別命名為S<,38>及S<,39>，則金水2號(hào)S基因型為S<,3>S<,21>，寶珠梨為S<,7>S<,33>，蒼溪雪梨為S<,5>S<,38>，灌陽雪梨為S<,7>S<,39>

7、； 9．沙梨部分氨基酸序列比對結(jié)果顯示，所測序的四個(gè)S基因均具有薔薇科植物S-RNases的保守區(qū)C1及C2及高變區(qū)HV，說明所擴(kuò)增的片段為S基因； 10．Clustal X（1.81）對梨五個(gè)種及部分其他薔薇科植物S-RNases的部分氨基酸序列進(jìn)行比對后建立的系統(tǒng)樹顯示，李亞科李屬甜櫻桃與梅聚為一組，蘋果亞科蘋果屬蘋果與梨屬梨的五個(gè)種聚為一組，梨的五個(gè)種并沒有單獨(dú)聚類，符合薔薇科植物S-RNase的多態(tài)性發(fā)生在物種形