N-氨甲酰谷氨酸合成及其生理功能研究.pdf

1、本文闡述了以谷氨酸為原料N-氨甲酰谷氨酸(NCG)的合成工藝,其次利用分子生物學(xué)方法研究了其對(duì)母豬生理功能的影響機(jī)制;最后通過(guò)毒理學(xué)試驗(yàn)評(píng)價(jià)其作為飼料添加劑的安全性能,其主要實(shí)驗(yàn)內(nèi)容如下：
　　 試驗(yàn)一：以谷氨酸、尿素為原料,經(jīng)過(guò)成鹽、縮合、酸化,再重結(jié)晶得到目標(biāo)化合物N-氨甲酰谷氨酸的合成路線得到產(chǎn)品純度≧99％,總收率≧87％。針對(duì)文獻(xiàn)中NCG獲得方法的不足之處做了如下改進(jìn):采用化學(xué)合成法,產(chǎn)品簡(jiǎn)單易得,副產(chǎn)物少、縮短反應(yīng)時(shí)

2、間。直接使用濃鹽酸酸化,簡(jiǎn)化了工藝流程,降低了生產(chǎn)成本;通過(guò)優(yōu)化摩爾配比、反應(yīng)溫度、濃鹽酸的用量等試驗(yàn)條件減少了氨類副產(chǎn)物,從而避免了分離純化步驟,收率高出文獻(xiàn)值20％。合成選擇堿性體系水解目標(biāo)化合物,避免了酸性水解中產(chǎn)生氫氰酸帶來(lái)的安全隱患。對(duì)目標(biāo)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)均通過(guò)液質(zhì)及核磁共振進(jìn)行了表征,證實(shí)了與目標(biāo)物及其中間體的分子結(jié)構(gòu)完全相符合。目前,其合成工藝文獻(xiàn)報(bào)道較少,在國(guó)內(nèi)也未見(jiàn)規(guī)模化生產(chǎn)。
　　 試驗(yàn)二：以豬作為動(dòng)物模型,研究

3、ARG和NCG對(duì)妊娠母豬生產(chǎn)性能的影響。VEGF-A、PLGF和eNOS可能在妊娠母豬營(yíng)養(yǎng)供給作用產(chǎn)生的分子機(jī)理中發(fā)揮重要作用。提出“ARG-NO-VEGF途徑影響母豬胎盤(pán)血液供給”的假設(shè)。試驗(yàn)選用體重、胎次、年齡、上胎產(chǎn)仔成績(jī)相近的懷孕90天的健康長(zhǎng)大母豬27頭,隨機(jī)分成3組:空白對(duì)照組、ARG組和NCG組,每組9個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)1頭,分別飼喂以下三種日糧:基礎(chǔ)日糧,基礎(chǔ)日糧中添加1％ARG和0.1％NCG。記錄各項(xiàng)生產(chǎn)指標(biāo),采集胎盤(pán)

4、尿囊絨毛膜組織,熒光定量PCR檢測(cè)VEGF-A、PLGF、eNOS基因表達(dá)水平。試驗(yàn)三結(jié)果顯示： ①ARG組和NCG組活仔初生總窩重顯著提高(P＜0.05),ARG組窩均活仔頭數(shù)比對(duì)照組有提高的趨勢(shì)(0.05＜P＜0.1),窩均死胎數(shù)顯著減低(P＜0.05)；②母豬血漿中,試驗(yàn)組NO、VEGF-A和NOS濃度均高于對(duì)照組；③試驗(yàn)組ARG和NCG胎盤(pán)組織VEGF-A、PLGF、eNOS基因表達(dá)量均高于對(duì)照組。
　　 試驗(yàn)三：50只

5、清潔級(jí)昆明小鼠隨機(jī)分為五組。NCG分別為按2500mg/kg·BW,1250mg/kg·BW和625mg/kg·BW作為高、中、低劑量組灌服劑量。另分別設(shè)一陽(yáng)性對(duì)照組(環(huán)磷酰胺40mg/kg)和陰性對(duì)照組(蒸餾水)。按常規(guī)方法(GB15193.7-2003)進(jìn)行小鼠精子畸形試驗(yàn)。采用連續(xù)經(jīng)口給予受試物5天,從首次給予受試物計(jì)第35天頸椎脫臼處死動(dòng)物,取雙側(cè)附睪制片,每只動(dòng)物計(jì)算1000個(gè)精子中的畸形數(shù),計(jì)算畸形率。試驗(yàn)三結(jié)果顯示,NCG