山東省核桃(Juglansregia)主要病害病原鑒定.pdf

1、核桃(Juglans regia)是重要的“木本糧油”生態(tài)樹種，隨著其集約栽培程度的不斷提高和種植面積擴(kuò)大，病害危害日趨嚴(yán)重，已成為核桃產(chǎn)業(yè)發(fā)展面臨的嚴(yán)峻問題。本研究對(duì)山東核桃主要產(chǎn)區(qū)病害危害情況進(jìn)行了調(diào)查，分離了核桃主要病害的病原，對(duì)分離的病原物通過形態(tài)學(xué)結(jié)合DNA分子檢測(cè)進(jìn)行了鑒定，并經(jīng)接種實(shí)驗(yàn)，確定了核桃主要病害的病原。主要結(jié)果如下：
　　 1.山東省核桃主要病害：通過2009－2010年在山東農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)實(shí)驗(yàn)站、山東省泰

2、安市邱家店綠園經(jīng)濟(jì)林研究所、山東省濟(jì)寧市汶上金曇核桃研究所、山東省臨沂市費(fèi)縣芍藥鄉(xiāng)核桃種植區(qū)的定點(diǎn)調(diào)查，山東省目前核桃主要病害按嚴(yán)重程度依次為核桃炭疽病、黑斑病、潰瘍病、枯梢病和褐色頂端壞死病。
　　 2.核桃炭疽病(Walnut anthracnose)：核桃炭疽病主要危害果實(shí)，同時(shí)還危害葉片、嫩梢。本研究從炭疽病病部組織分離得到病原菌株中，選取17個(gè)作為供試菌株。在PDA 培養(yǎng)基上，供試菌株形態(tài)表現(xiàn)為菌絲含油球；分生孢子單胞

3、無色、內(nèi)含油球，大小10.4-15.0μm×4.6-6.4μm；附著胞形態(tài)分為卵形、近圓形、裂葉狀和不規(guī)則形，淺褐色或深褐色，平均大小為10.2μm×7.3μm。用供試菌株ITS序列（Genbank序列號(hào)為：
　　 HQ845100-HQ845107，HM016792-HM016798，GU597322，HQ828096）進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析后，所有供試菌株均與膠孢炭疽Colletotrichum gloeosporioides 聚

4、在一類。選用代表性菌株‘w-2'、‘M9'、‘wsg2'進(jìn)行致病實(shí)驗(yàn)，6月份接種果實(shí)平均發(fā)病100％，葉片平均發(fā)病100％，枝干平均發(fā)病86％；7月份接種果實(shí)發(fā)病62％，葉片平均發(fā)病100％，枝干平均發(fā)病83％。從發(fā)病部位均能重新分離得到接種病原。據(jù)此，核桃炭疽病病原為膠孢炭疽菌C.Gloeosporioides。
　　 3.核桃褐色頂端壞死病和黑斑?。˙rown apical necrosis ＆ Walnut blight）

5、：核桃褐色頂端壞死病和核桃黑斑病癥狀不同，褐色頂端壞死病發(fā)病于花后雌蕊基部、果實(shí)頂端，黑斑病發(fā)病較褐色頂端壞死病為遲，主要危害果實(shí)青皮、葉片、枝梢。但兩種病害是復(fù)合侵染性病害，病部組織都能分離得到鏈格孢（Alternaria spp.）、成團(tuán)泛菌（Pantoea agglomerans）和核桃黃單胞桿菌（Xanthomonas arboricola p v.Juglandis）。從分離的真菌病原物中，選取真菌菌株34個(gè)作為供試菌株。在P

6、CA 培養(yǎng)基上供試菌株的菌落特征分為三組，分生孢子形態(tài)表現(xiàn)為2組，產(chǎn)孢表型為2種。根據(jù)形態(tài)特征將其中33個(gè)鑒定為鏈格孢菌A.alternata，1個(gè)鑒定為細(xì)極鏈格孢菌A.tenuissima。
　　 對(duì)供試菌株ITS(GenBank 登錄號(hào)：JF835805-JF835834，JF835903-JF835906）、OPA2-1（JF835834-JF835868）和OPA1-3（JF835869-JF835899）各區(qū)段的DNA

7、序列進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析，這些序列對(duì)鏈格孢有區(qū)分性，但用這些序列不能對(duì)鏈格孢小孢子種在種的水平上進(jìn)行有效分類，鏈格孢真菌在遺傳上有較大差異。用鏈格孢（A.
　　 Alternata）代表型菌株‘6hao'、‘10-39'和細(xì)極鏈格孢（A.Tenuissima）代表型菌株‘10-19'分田間刺傷接種，均有致病性，從發(fā)病部位均能重新分離得到接種病原。
　　 成團(tuán)泛菌落圓形，光滑，蠟黃色，菌體呈聚集生長(zhǎng)，菌體直桿狀，菌體大小為0.

8、9-3.0μm×0.6-1.2μm，周生4-6根鞭毛；菌株‘HXJ'的ITS序列HM016799 與已知成團(tuán)泛菌（Pantoea agglomerans)ITS序列HQ242740、GU477762、GQ494018的同源性均高達(dá)99％，故將該類菌鑒定為成團(tuán)泛菌。接種實(shí)驗(yàn)證明成團(tuán)泛菌主要引起核桃果實(shí)內(nèi)生型頂端壞死，并引起枝葉感病，且參與黑斑病致病過程。
　　 核桃黃單胞桿菌菌落圓形，光滑，黃綠色，菌體短桿狀，菌體大小為0.3-1

9、.8μm×0.3-0.8μm，端生一根鞭毛；菌株‘lxj1'和‘lxj2'的ITS序列JF835909和JF835910 均與核桃黃單孢桿菌（Xanthomonas arboricola pv.Juglandis）菌株‘NCPPB411'的ITS序列（AB558555）有99％的同源性，故將其鑒定為：Xanthomonasarboricola pv.Juglandis。接種實(shí)驗(yàn)證明核桃黃黃單孢桿菌主要引起果實(shí)、葉片和枝梢黑斑病，也誘發(fā)幼

10、果頂端壞死。
　　 4.核桃潰瘍病（Walnut canker）：從潰瘍病病部組織分離的菌株中，選取4個(gè)作為供試菌株。供試菌株在PDA 培養(yǎng)基上培養(yǎng)特征表現(xiàn)一致，顯微觀察其分生孢子梭形，基部鈍圓或稍尖，透明，光滑，含有油滴狀內(nèi)含物，孢子大小范圍23.2-27.5μm×4.1-8.2μm。菌株‘3hao'的ITS序列JF835907 與已知的葡萄座腔球菌（Botryosphaeria dothidea）ITS序列GU226852、

11、HQ392697的同源性高達(dá)99％，將其鑒定為葡萄座腔球菌B.Dothidea。田間觀察和接種實(shí)驗(yàn)表明，葡萄座腔球菌能引起核桃主干及主側(cè)枝基部的潰瘍，感染小枝出現(xiàn)枯梢癥狀，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)致樹體死亡。
　　 5.核桃枯梢病（Walnut shoot dieback）：從該病病部組織可分離得到葡萄座腔球菌（B.Dothidea）和擬莖點(diǎn)霉（Phomopsis sp.）。擬莖點(diǎn)霉在PDA培養(yǎng)基上可產(chǎn)生成熟的甲、乙型分生孢子。甲型分生孢子紡

12、錘形或橢圓形，無色單胞，含油球；乙型分生孢子細(xì)長(zhǎng)如線，一端彎曲有時(shí)呈鉤狀，無色單胞。菌株‘ Z3-19Y5 '的ITS序列（JF835912）與已知的已知的桃潰瘍病病原Phomopsis amygdali（AF103001）、藍(lán)莓果腐病原Phomopsis vaccinii（EU520050）的同源性均高達(dá)99％。但菌株‘Z3-19Y5'的形態(tài)特征與Phomopsis amygdali有較大差異，與P.Vaccinii 在分生孢子器、甲