離體培養(yǎng)大巖桐花初切塊花芽分化過(guò)程中開(kāi)花相關(guān)基因表達(dá)及內(nèi)源激素的定量分析.pdf

1、植物激素參與植物生長(zhǎng)發(fā)育的整個(gè)過(guò)程，包括種子萌發(fā)、莖的伸長(zhǎng)、花及果實(shí)的發(fā)育等。大巖桐是苦苣苔科的一種日中性植物，開(kāi)花無(wú)需春化作用，從播種到開(kāi)花僅需3-4個(gè)月。我們已經(jīng)建立了赤霉素和細(xì)胞分裂素協(xié)同促進(jìn)離體培養(yǎng)大巖桐花被切塊直接再生花芽的體系。為了進(jìn)一步探討花被切塊直接再生花過(guò)程中花發(fā)育相關(guān)基因以及內(nèi)源植物激素的變化規(guī)律，我們利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，測(cè)定培養(yǎng)不同時(shí)間的大巖桐花被、幼葉切塊中SsSOCla和SsSPY的相對(duì)表達(dá)量；并通過(guò)酶

2、聯(lián)免疫吸附法測(cè)定不同培養(yǎng)時(shí)間花被、幼葉切塊中內(nèi)源激素的含量。
　　 主要研究結(jié)果如下：
　　 1.根據(jù)大巖桐SsActin、SsSPY和SsSOCla的相對(duì)保守核苷酸序列設(shè)計(jì)引物，以SsActin為內(nèi)參，大巖桐花瓣、花萼、幼葉切塊離體培養(yǎng)0-21d期間，進(jìn)行SsSPY和SsSOCla基因?qū)崟r(shí)熒光定量表達(dá)分析。結(jié)果表明：在花瓣、花萼、幼葉培養(yǎng)初期，SsSOCla基因表達(dá)呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，在花瓣和花萼中SsSOCla基因表達(dá)峰

3、值都出現(xiàn)在15d，花瓣中SsSOCla基因的相對(duì)表達(dá)量高達(dá)12.04;而幼葉中SsSOCla基因表達(dá)峰值出現(xiàn)在18d，相對(duì)表達(dá)量?jī)H為5.82。在花瓣、花萼、幼葉培養(yǎng)初期，SsSPY的表達(dá)量呈上升趨勢(shì)，至10d時(shí)，花瓣與幼葉中均出現(xiàn)表達(dá)高峰，相對(duì)表達(dá)量分別為7.46和6.19，之后均下降；花萼中的峰值出現(xiàn)在15d時(shí)，相對(duì)表達(dá)量?jī)H為5.94。
　　 2.用酶聯(lián)免疫方法，測(cè)定了培養(yǎng)不同時(shí)間大巖桐花瓣、花萼、幼葉切塊4種內(nèi)源植物激素的含

4、量，結(jié)果表明：脫落酸(ABA)在材料中的含量明顯的高于其它3種激素，而幼葉中的含量又比花瓣與花萼中高很多，最高達(dá)2622050pg/g(18d)；培養(yǎng)15d以后，玉米素核苷(ZR)的含量變化出現(xiàn)了分歧，花萼與幼葉中都在上升，而花瓣始終維持在1600pg/g左右；吲哚乙酸（IAA）的含量是最低的，整體而言，花瓣與花萼的含量要高于幼葉，其含量分別可高達(dá)0.30pg/g和0.25pg/g，而幼葉中僅達(dá)0.20pg/g;赤霉素(GA)在花瓣中的