土壤中煙草疫霉菌的分離鑒定及硼酸鈉對其生長的影響.pdf

1、煙草黑脛病是煙草生產(chǎn)上最具毀滅性的病害之一,可以危害烤煙、晾煙、曬煙、白肋煙、香料煙等所有栽培煙草,對煙草業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。此病的致病菌是煙草疫霉菌,是一種喜高溫、高濕的兼性寄生真菌,其菌絲體、卵孢子及厚垣孢子可在遺落土壤或混雜堆肥中的植株殘余組織上越冬,是一種典型的土壤寄居菌,可以在煙草生長季節(jié)侵染煙草引起病害,當(dāng)煙草收割以后,病菌又以不同形式轉(zhuǎn)入土壤中生存,有文獻(xiàn)報(bào)道在無煙草存在的土壤中,該菌可存活5年或更長,在風(fēng)干土中,亦可存

2、活18個(gè)月之久快速地明確土壤中煙草疫霉菌的活菌數(shù)量,有助于了解土壤中煙草疫霉菌的分布和密度,對預(yù)測煙草疫霉菌的發(fā)生動(dòng)態(tài)、及時(shí)發(fā)布災(zāi)情預(yù)報(bào)具有重要意義。
　　 土壤中疫霉菌數(shù)量與煙草黑脛病發(fā)生成正相關(guān),因此建立一種快速簡便的計(jì)數(shù)方法有助于預(yù)測災(zāi)情和減少損失。將稀釋平板法、選擇性培養(yǎng)基、微量真菌DNA提取及定性PCR相結(jié)合,建立一種土壤煙草疫霉菌快速計(jì)數(shù)方法。結(jié)果表明:10-2稀釋濃度和選擇性培養(yǎng)基能很好抑制絕大多非疫霉菌和所有細(xì)菌

3、生長,有利于對土壤中煙草疫霉菌進(jìn)行分離計(jì)數(shù);微量真菌DNA提取方法提取的菌落DNA能夠滿足定性PCR的要求,采用的特異引物只能從疫霉菌中擴(kuò)增到737bp的特異性片段;利用真菌ITS驗(yàn)證了該方法確定的6個(gè)土壤煙草疫霉菌與已報(bào)道煙草疫霉菌相似度達(dá)99%以上;表明該方法完全適宜于土壤中煙草疫霉菌數(shù)量的鑒定及計(jì)數(shù),具有相對準(zhǔn)確、低成本、簡單易推廣的優(yōu)點(diǎn)。
　　 硼是高等植物正常生長必需的微量元素之一,目前已有的研究發(fā)現(xiàn),提高植物組織中硼

4、元素的含量可以增強(qiáng)植物對某些病害的抗性;另有一些研究發(fā)現(xiàn)硼對病原菌也產(chǎn)生直接的影響。本文研究了硼酸鈉對煙草疫霉菌生長的影響。研究結(jié)果表明,隨著硼濃度的提高,煙草疫霉菌孢子囊的產(chǎn)量以及孢子囊的釋放率都顯著下降。單因素方差分析結(jié)果表明,幾個(gè)硼濃度處理與對照之間都達(dá)到極顯著差異(0.01);0.1mM的硼就可以極顯著地抑制煙草疫霉菌孢子囊的產(chǎn)生以及釋放;對煙草疫霉菌孢子的萌發(fā)亦有抑制作用,但抑制作用不強(qiáng),主要是減緩了孢子萌發(fā)的速度。8mM以上

5、的硼濃度就可以顯著抑制煙草疫霉菌菌絲的擴(kuò)展;液體培養(yǎng)基中,當(dāng)硼濃度低于12mM時(shí),煙草疫霉菌的菌絲干重隨硼濃度的升高而增加,當(dāng)硼濃度大于12mM時(shí),菌絲干重隨硼濃度的升高而減少。8mM、12mM、16mM硼濃度處理對胞內(nèi)蛋白的表達(dá)沒有明顯影響,但對胞外蛋白的表達(dá)卻有明顯影響;在8mM、12mM的硼濃度處理下,煙草疫霉菌的菌絲體干重的增加可能與胞外蛋白的表達(dá)差異有關(guān),暗示高濃度的硼可能會促進(jìn)煙草疫霉菌的生長,即高濃度和低濃度的硼處理,可能