Treg細(xì)胞在布魯氏菌M5-90弱毒誘導(dǎo)機(jī)體免疫應(yīng)答中的作用.pdf

1、布魯氏菌病(Brucellosis)由布魯氏菌(Bruce1la)侵入機(jī)體引起,以流產(chǎn)、不育和弛張熱為臨床特征的人獸共患病。該病在人畜間廣泛流行,世界170個國家和地區(qū)均有該病的發(fā)生,在我國新疆和青海兩省尤為突出,給畜牧業(yè)生產(chǎn)和人類健康帶來了嚴(yán)重的危害。布魯氏菌是典型的胞內(nèi)寄生菌,主要以細(xì)胞免疫為主,T細(xì)胞在其誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答中發(fā)揮著重要作用。CD4+CD25+T細(xì)胞(Treg)對免疫應(yīng)答具有調(diào)節(jié)功能,主要表現(xiàn)為免疫無反應(yīng)性和免疫抑制性,

2、可以通過下調(diào)機(jī)體的免疫應(yīng)答來維持機(jī)體穩(wěn)定和免疫耐受,當(dāng)Treg細(xì)胞數(shù)量低下和功能紊亂可導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。Foxp3(Fork head box p3)是特異性表達(dá)在Treg細(xì)胞上的一類轉(zhuǎn)錄因子,Foxp3的活化對Treg細(xì)胞發(fā)育和轉(zhuǎn)化有較大的影響。對Treg細(xì)胞的免疫調(diào)控研究將有助于對布魯氏菌免疫機(jī)制的理解及防治新策略的制定。目前Treg細(xì)胞是否參與了綿羊?qū)Σ剪斒暇鶰5-90弱毒的免疫反應(yīng)調(diào)控尚不清楚,為了探討Treg細(xì)胞在布魯氏菌M

3、5-90弱毒疫苗誘導(dǎo)機(jī)體免疫應(yīng)答中的作用,本項(xiàng)目主要開展了以下研究工作:
　　1、外周血CD4+、CD8+T、CD4+CD25+Treg在綿羊接種布魯氏菌M5-90弱毒疫苗后的動態(tài)變化:以布魯氏菌M5-90弱毒間隔10天接種布病陰性綿羊,共接種三次,頸靜脈采血,新鮮血液2小時內(nèi)流式細(xì)胞儀測定Treg細(xì)胞及T細(xì)胞亞群并進(jìn)行分析;結(jié)果顯示CD4+T、CD8+T淋巴細(xì)胞均在第20天達(dá)到顯著升高水平,前者為40.44％,后者為28.79%

4、,而后均開始降低;Treg細(xì)胞自接種后處于上升趨勢,第30天時達(dá)到9.07%的最高水平;而CD4+/CD8+則始終保持在1.49的水平。研究結(jié)果提示Treg細(xì)胞參與了布魯氏菌M5-90弱毒疫苗的免疫應(yīng)答調(diào)控,Treg細(xì)胞的上調(diào)抑制了CD4+T、CD8+T淋巴細(xì)胞的增殖,且維持機(jī)體Th1/Th2細(xì)胞之間反應(yīng)的平衡;
　　2、綿羊接種布魯氏菌M5-90弱毒疫苗后IL-1β、IL-6及抗體水平檢測研究:分離血清,以虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管

5、凝集試驗(yàn)相結(jié)合的方法進(jìn)行布魯氏菌抗體水平的測定,在接種的第10天、20天、30天,抗體陽性率均為100%,且一免后即達(dá)到陽性,二免時水平最高,三免時略微下降;用ELISA方法檢測了IL-1β、IL-6的變化,發(fā)現(xiàn)IL-1β總體呈緩慢升高趨勢,三免時達(dá)到顯著水平,IL-6則緩慢下降,但各階段變化均不顯著;布魯氏菌抗體水平及IL-1β、IL-6等細(xì)胞因子的變化提示Treg細(xì)胞參與了布魯氏菌M5-90弱毒疫苗誘導(dǎo)的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答過程,

6、且IL-1β可能起到促進(jìn)Treg細(xì)胞擴(kuò)增的作用;
　　3、綿羊接種M5-90后Treg細(xì)胞中Foxp3基因表達(dá)的檢測研究:分離淋巴細(xì)胞,提取RNA,根據(jù)GenBank上的綿羊Foxp3基因mRNA序列和內(nèi)參基因序列分別設(shè)計(jì)引物,采用realtimeRT-PCR技術(shù)分析Foxp3基因的表達(dá)情況。結(jié)果Foxp3基因表達(dá)隨著免疫次數(shù)的增加呈升高趨勢,第30天時相對表達(dá)量達(dá)到高峰;提示其促進(jìn)了Treg細(xì)胞的發(fā)育與轉(zhuǎn)化并協(xié)助Treg細(xì)胞發(fā)揮