尾狀山羊草品質(zhì)基因克隆與序列分析.pdf

1、本研究以尾狀山羊草(Y46)為材料，克隆了其高分子量谷蛋白亞基(HMW-GS)、低分子量谷蛋白亞基(LMW-GS)、α-，γ-和ω-醇溶蛋白的編碼基因，并根據(jù)其編碼基因推導(dǎo)出氨基酸序列，以此為基礎(chǔ)分析了它們的分子結(jié)構(gòu)。主要結(jié)果如下：
　　 1、SDS-PAGE分析了Y46的HMW-GS組成，結(jié)果表明，Y46共有兩個(gè)HMW-GS，根據(jù)HMW-GS的分子量確認(rèn)分子量較大的為x亞基，較小的為y亞基。x亞基的遷移率比1Ax1略大，y亞基

2、的遷移率在1By8和1By9之間。根據(jù)HMW-GS的命名規(guī)則，將這兩個(gè)亞基分別命名為1Cx1.1和1Cy9.1。
　　 2、利用已公布的HMW-GS編碼基因的保守區(qū)設(shè)計(jì)了一對(duì)兼并引物，對(duì)Y46的基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，得到了1Cx1.1和1Cy9.1的編碼序列，分別為2631bp和1932bp。經(jīng)過分析推導(dǎo)出的氨基酸序列，表明所克隆的兩個(gè)基因與已知的HMW-GS具有較高的同源性，其蛋白分子可分為四個(gè)結(jié)構(gòu)域：一、信號(hào)肽(在成熟的蛋白

3、質(zhì)中被切除)；二、保守的N末端；三、存在較大變異的中央重復(fù)區(qū)；四、保守的C末端。1Cx1.1的氨基酸序列較大，雖然沒有額外的半胱氨酸殘基，但是其大量的氫鍵依然對(duì)面粉的品質(zhì)具有正向作用，此外，在1Cx1.1的重復(fù)區(qū)中存在一個(gè)特殊的三肽-三肽串聯(lián)結(jié)構(gòu)，在已知的x亞基中極少出現(xiàn)。1Cy9.1的N端第31位氨基酸由纈氨酸替換了丙氨酸。原核表達(dá)進(jìn)一步表明，克隆的這兩個(gè)基因體外表達(dá)的蛋白與HMW-GS具有相同的電泳遷移率。
　　 3、利用已

4、公布的LMW-GS編碼基因設(shè)計(jì)一對(duì)引物進(jìn)行擴(kuò)增，經(jīng)測序分析共得到兩個(gè)LMW-GS的編碼基因，分別命名為Y46-LMW1和Y46-LMW2。將推導(dǎo)出的氨基酸序列與已公布的LMW-GS進(jìn)行多重序列比對(duì)，這兩個(gè)LMW-GS分別為i型和m型亞基，它們的結(jié)構(gòu)與已知的LMW-GS有極高的相似性，僅僅存在個(gè)別氨基酸的差異。
　　 4、本試驗(yàn)克隆得到5個(gè)α-醇溶蛋白基因，6個(gè)γ-醇溶蛋白基因和5個(gè)ω-醇溶蛋白基因，經(jīng)與已知對(duì)應(yīng)的蛋白進(jìn)行相似度比