不同類型內(nèi)蒙古白絨山羊瘤胃甲烷菌數(shù)量及多樣性比較研究.pdf

1、分別采集阿爾巴斯型、二郎山型、阿拉善型白絨山羊瘤胃液，通過(guò)發(fā)酵參數(shù)測(cè)定、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析（RFLP）、實(shí)時(shí)熒光定量分析（qPCR），對(duì)三種類型內(nèi)蒙古白絨山羊瘤胃發(fā)酵特性、產(chǎn)甲烷菌菌群多樣性和數(shù)量進(jìn)行比較研究。
　　試驗(yàn)一，不同類型內(nèi)蒙古白絨山羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)的比較研究。
　　試驗(yàn)結(jié)果表明，阿拉善型瘤胃液pH值顯著低于阿爾巴斯型（P=0.017），其它各組之間無(wú)顯著差異。阿拉善型氨態(tài)氮濃度極顯著高于阿爾巴斯型和二郎山型（

2、P<0.001）。乙酸濃度阿拉善型極顯著高于阿爾巴斯型（P=0.007）。丙酸濃度阿拉善型顯著高于阿爾巴斯型（P=0.025）。丁酸濃度阿拉善型顯著高于阿爾巴斯型和二郎山型（P=0.023）。乙酸/丙酸阿爾巴斯型極顯著低于二郎山型和阿拉善型（P=0.004）?？倱]發(fā)性脂肪酸濃度阿拉善型顯著高于阿爾巴斯型（P=0.011）。
　　試驗(yàn)二，不同類型內(nèi)蒙古白絨山羊瘤胃甲烷菌多樣性的比較研究。
　　提取三種白絨山羊瘤胃液微生物基因組

3、，選取特異性引物Met86f/Met1304r擴(kuò)增瘤胃甲烷菌16srDNA基因片段，并建立基因文庫(kù)，用限制性內(nèi)切酶Hind III進(jìn)行RFLP分析，建立系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。結(jié)果表明，不同類型內(nèi)蒙古白絨山羊瘤胃中甲烷菌菌群不同，即阿爾巴斯型：3種產(chǎn)甲烷菌，優(yōu)勢(shì)甲烷菌為DQ402028，屬于未培養(yǎng)的產(chǎn)甲烷菌。阿拉善型：4種甲烷菌，優(yōu)勢(shì)菌為 DQ135988，屬于甲烷短桿菌。二郎山型：3種甲烷菌，優(yōu)勢(shì)菌為JF807221，屬于未培養(yǎng)的產(chǎn)甲烷菌。

4、>　　試驗(yàn)三，不同類型內(nèi)蒙古白絨山羊瘤胃甲烷菌數(shù)量的比較研究。
　　選取甲烷菌特異性引物 Met630F/Met803R進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，回收 PCR產(chǎn)物中的DNA用以克隆，并提取標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)瘤胃中甲烷菌進(jìn)行絕對(duì)定量。結(jié)果表明，阿爾巴斯型、二郎山型和阿拉善型內(nèi)蒙古白絨山羊瘤胃液中產(chǎn)甲烷菌的拷貝數(shù)依次為4.5×108、6.68b×108、3.89×109copy/ml，且阿爾巴斯型極顯著高于阿拉善型（P<0