豬鏈球菌2型對細胞的粘附作用和炎癥相關細胞因子轉錄的影響.pdf

1、豬鏈球菌2型（Streptococcus suis serotype2，SS2）是一種是在世界范圍內(nèi)引起豬多種形式感染的病原;也是一種人畜共患病病原，可引起人腦膜炎，嚴重危害著養(yǎng)豬業(yè)及相關從業(yè)人員的安全。目前雖然SS2感染后致病機理仍然沒有完全明確，但認為細菌粘附作用及炎癥反應在致病過程中起重要作用。細菌粘附并侵襲細胞在細菌定植黏膜屏障過程中不是必須的，但它們是細菌定植的重要一步。一旦細菌進入血液循環(huán)和/或達到深層組織，將會受到先天性免

2、疫系統(tǒng)中吞噬細胞的作用;但SS能夠抵御吞噬作用，并以高濃度細菌在血液中持續(xù)存在，結果引發(fā)炎癥。但細菌粘附能力是否可以作為細菌致病力的標志，不同SS2菌株粘附能力的差異的分子機制仍未得到很好的闡明。研究單核細胞與細菌相互作用的過程中，單核細胞釋放的炎性相關細胞因子，對闡明SS2介導和調(diào)節(jié)炎癥反應中具有一定的意義。
　　 本研究選擇不同來源的具有不同毒力因子的SS2菌株與PK-15、HEp-2及PIEC細胞共孵育3h后，觀察SS2菌

3、株粘附細胞的能力。并通過建立SS2粘附因子的熒光定量PCR檢測方法，對粘附試驗所用菌株的粘附因子mRNA轉錄水平進行檢測，以確定粘附因子轉錄水平是否影響細菌粘附細胞的能力。同時通過建立豬細胞因子IL-1β、IL-18、IL-8、IL-12和IL-10的熒光定量PCR檢測方法，檢測部分菌株刺激3D4豬肺泡巨噬細胞后上述細胞因子mRNA轉錄水平的變化。
　　 1.SS2對PK-15、HEp-2和PIEC細胞的粘附作用用1.0×107

4、CFU SS2菌株分別與PK-15、HEp-2和PIEC等3種細胞孵育3h后，平板計數(shù)。結果表明不同菌株對同一種細胞的粘附能力不同，同一株細菌對3種細胞的粘附能力也不同。相關蛋白酶處理后的細菌可以減弱這種粘附作用。表明SS2具有粘附相關上皮細胞和內(nèi)皮細胞的能力，且這種粘附能力與菌株和細胞類型均有關聯(lián)。而細菌粘附能力強弱與細菌毒力強弱之間沒有必然的關系。
　　 2.豬鏈球菌2型粘附因子SYBR GreenⅠ熒光定量PCR檢測方法的

5、建立及體外mRNA轉錄水平的檢測根據(jù)已經(jīng)報導的SS2相關粘附因子及管家基因aroA，以GenBank登錄的核苷酸序列，設計特異性引物，經(jīng)RT-PCR克隆和擴增了各粘附因子的核苷酸片段，構建含有各自引物擴增序列的重組質粒作為陽性模板，建立檢測各粘附因子SYBR GreenⅠ熒光定量PCR方法。通過檢測粘附試驗中SS2各菌株粘附因子轉錄水平，初步闡明SS2粘附因子轉錄水平確實影響細菌粘附細胞的能力，為后續(xù)研究SS2粘附能力及致病機制提供研究

6、平臺。
　　 3.豬IL-1β、IL-18、IL-8、IL-10、L-12及β-actin SYBR GreenⅠ熒光定量PCR檢測方法的建立及SS2對3D4豬肺泡巨噬細胞炎癥相關細胞因子的體外mRNA轉錄分析依據(jù)GenBank中登錄的各豬細胞因子及管家基因β-actin的核苷酸序列，設計特異性引物，經(jīng)RT-PCR從3D4豬肺泡巨噬細胞系中克隆和擴增了上述三個因子的核苷酸片段，構建含有各自引物擴增序列的重組質粒作為陽性模板(IL