枯草芽孢桿菌菌株Bv10胞外抗菌物質(zhì)的純化及其特性測(cè)定.pdf

1、本研究以芝麻白絹病菌(Athelia rolfsii)為指示菌，對(duì)枯草芽孢桿菌菌株Bv10的發(fā)酵條件、抗菌物質(zhì)的純化、胞外抗菌物質(zhì)的理化性質(zhì)、抗菌物質(zhì)的部分作用機(jī)制及其毒力和盆栽防效進(jìn)行了研究。取得的主要研究結(jié)果如下:
　　 1、最適培養(yǎng)菌株Bv10的條件為:溫度30℃、初始pH值為8.0、接種量為3％、裝液量為100 mL/250 mL的三角瓶、轉(zhuǎn)速為170 rpm、最佳培養(yǎng)時(shí)間是5d。
　　 菌株Bv10生長(zhǎng)和高產(chǎn)抗

2、菌物質(zhì)的培養(yǎng)基配方(w/v)為:麥芽糖3.0％，NH4Cl0.5％，牛肉浸膏0.5％，K2HPO43.0％，MgSO4·7H2O0.5％。
　　 2、該抗菌粗提取物對(duì)熱穩(wěn)定，但121℃高壓下，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，熱穩(wěn)定稍下降。在pH7～9的范圍內(nèi)，菌株Bv10產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)的抑菌活性較穩(wěn)定。抗菌物質(zhì)置于日光燈和自然光下照射1～5 d，活性沒(méi)有改變。胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、果膠酶對(duì)該抗菌物的抗菌活性也沒(méi)有影響。此外，菌株B

3、v10產(chǎn)生的抗菌粗提物能溶于磷酸緩沖液、甲醇、水，不溶于丙酮、乙腈、二氯甲烷。
　　 菌株Bv10產(chǎn)生的抗菌粗提取物對(duì)14種植物病原真菌[向日葵細(xì)交鏈格孢菌Alternaria alternata、污斑擬盤(pán)多毛孢Pestalotiopsis foedans、蘋(píng)果輪紋病菌Botryosphaeria berengerianaf.sp.piricola、粉紅聚端孢菌Trichothecium roseum、瓜果腐霉Pythium a

4、phanidermatum、香蕉褐緣灰斑病菌Pseudocercospora musae、山茱萸葉枯病菌Botryosphaeria dothidea、萵苣灰霉病菌Botryotinia fuckeliana、芝麻白絹病菌Athelia rolfsii、玉米穗腐病菌（Gibberellazeae、Fusarium equiseti、G.moniliformis、F.proliferatum）、大葉黃楊炭疽菌Colletotrichum

5、gloeosporioides]和兩種非植物病原真菌（毛殼霉Chactomium globosum、脈永孢菌Gelasinospora brevispora）的生長(zhǎng)有較好的抑制作用，對(duì)終極腐霉Pythium ultimum和芝麻疫病菌Phytophthora sp.無(wú)抑制作用。對(duì)5種病原細(xì)菌（水稻細(xì)菌性條斑病菌Xanthomonas oryzae pv.oryzicola、水稻白葉枯病菌X.oryzae pv.oryzae、辣椒青枯病菌

6、Ralstonia solanacearum、柑橘潰瘍病菌Xanthomomas campestris pv.cirri和番茄細(xì)菌性斑點(diǎn)病菌Pseudomonas syringae pv.tomato）有抑制作用，對(duì)胡蘿卜軟腐果膠桿菌Pectobacterium carotovora沒(méi)有作用。
　　 3、經(jīng)鹽酸沉淀、甲醇萃取以及反相高效液相色譜(RP-HPLC)等方法，從菌株Bv10的無(wú)菌發(fā)酵液中提取和純化到A和B兩種對(duì)芝麻白絹

7、病菌具有較強(qiáng)抑制作用的活性物質(zhì)，其分子量分別為1042 Da和1057 Da。MALDI-TOF-MS/MS CID質(zhì)譜分析兩種純化物的分子的一級(jí)結(jié)構(gòu)均為Pro-Asn-Ser-βAA-Asn-Tyr-Asn-Gln，將純化物A鑒定為脂肽化合物伊枯草菌素iturinA2，將純化物B鑒定為iturin A4。
　　 4、純化物A和B濃度都為200 mg·L-1時(shí)可以完全抑制芝麻白絹病菌菌核的萌發(fā)，當(dāng)純化物的濃度為100 mg·L-

8、1和50 mg·L-1時(shí)，純化物A對(duì)菌核萌發(fā)的抑制率分別為82.22％和73.33％，純化物B對(duì)菌核萌發(fā)的抑制率分別為77.78％和68.89％。顯微鏡下觀察到受抑制的菌絲體扭曲變形，生長(zhǎng)紊亂，分隔處縊縮，甚至在分枝處斷裂，菌絲頂端膨大，原生質(zhì)體凝聚，頂端成囊泡狀。
　　 5、純化抗菌物質(zhì)A和B對(duì)芝麻白絹病菌的抑菌中濃度EC50值分別為36.7866mg·L-1和43.0329 mg·L-1。
　　 在盆栽防治試驗(yàn)中，先