MAPK在多倍體鯽鯉個體發(fā)育中的表達研究.pdf

1、MAPK(Mitogen-activated protein kinases)在多細胞生物個體發(fā)育、分化、細胞增殖、細胞存活和遷移、個體生長和細胞凋亡中扮演著重要的角色。以多倍體鯽鯉為材料,研究MAPK家族主要成員JNK和ERK在三倍體湘云鯽和四倍體鯽鯉不同發(fā)育時期胚胎和不同組織中的表達,進一步探討MAPK信號通路在魚類個體發(fā)育中的作用。
　　 首先,我們根據(jù)已知的金魚jnk1基因cDNA序列,克隆了三倍體湘云鯽與異源四倍體鯽鯉

2、中jnk1基因cDNA全長。三倍體湘云鯽jnk1基因cDNA全長為1425bp,編碼380個氨基酸;異源四倍體鯽鯉jnk1基因cDNA全長為1884bp,編碼384個氨基酸。通過BioEdit7.0對金魚、紅鯽、湘江野鯉、改良四倍體鯽鯉、改良三倍體鯽鯉的jnk1基因進行同源性分析,三倍體湘云鯽jnk1基因氨基酸序列與金魚、紅鯽、湘江野鯉、四倍體鯽鯉的同源性分別為:97.9％、100％、98.1％、96.8％;四倍體鯽鯉jnk1基因氨基酸

3、序列與金魚、紅鯽、湘江野鯉的同源性分別為:96.8％、96.8％、98.1％。三倍體湘云鯽jnk1基因與原始母本紅鯽的同源性最高;四倍體鯽鯉jnk1基因則與原始父本湘江野鯉同源性最高。
　　 運用RT-PCR技術(shù)和Western-blot檢測了jnk1基因在多倍體鯽鯉中的mRNA和蛋白水平表達。結(jié)果顯示,jnk1基因在多倍體鯽鯉組織和胚胎發(fā)育各個時期中均有表達。三倍體湘云鯽和異源四倍體鯽鯉卵裂期及囊胚中高JNK1 mRNA水平,

4、表明母源性jnk1基因參與多倍體魚早期胚胎發(fā)育調(diào)控。jnk1基因在三倍體湘云鯽和異源四倍體鯽鯉胚胎及成體組織中也表現(xiàn)出差異表達特征,在三倍體湘云鯽器官原基形成各個時期,JNK1蛋白表達水平相對較為恒定且有較高表達;而JNK1在異源四倍體鯽鯉器官原基形成各個時期的蛋白水平表達量則相對較低。利用Western-blot技術(shù)我們也檢測了ERK在多倍體鯽鯉組織和胚胎發(fā)育各個時期的蛋白表達水平,研究發(fā)現(xiàn)ERE1/2在三倍體湘云鯽和四倍體鯽鯉胚胎眼

5、色素時期及三倍體湘云鯽眼睛組織中有高量表達,推測ERK信號通路在魚類眼睛的生長發(fā)育過程中起著重要作用。
　　 最后檢測了JNK1和ERK1/2在多倍體鯽鯉及其原始親本性腺組織中的表達。結(jié)果顯示JNK1與ERK1/2在紅鯽、湘江野鯉、三倍體湘云鯽和異源四倍體鯽鯉的雌、雄性腺中均有表達,其中JNK1在紅鯽雌、雄性腺中的表達模式與湘江野鯉雌、雄性腺比較一致,兩者卵巢中的JNK1蛋白水平均高于精巢,P-JNK的表達模式與JNK的表達模式