黃瓜西瓜花葉病毒(WMV)抗性的遺傳研究和基因定位.pdf

1、西瓜花葉病毒是侵染葫蘆科的重要病毒之一，其在黃瓜上的流行受到人們的關(guān)注。傳統(tǒng)的病毒檢測方法受毒源、接種環(huán)境等限制，缺乏快速檢測方法。近幾年來，分子標(biāo)記技術(shù)被應(yīng)用于多方面。分子標(biāo)記輔助育種技術(shù)，相對于傳統(tǒng)育種，可以縮短育種周期，并且可從分子水平上找到抗病基因或與抗病相關(guān)的QTL位點。
　　 本試驗利用高代自交系“65G”（感?。┖汀?28”（抗病）構(gòu)建的六世代群體，對WMV進(jìn)行了遺傳規(guī)律的分析，并利用黃瓜基因組SSR引物對WMV的

2、抗病基因wmv進(jìn)行了定位。結(jié)果如下:
　　 1.通過對以高代自交系“65G”和“228”構(gòu)建的六世代群體進(jìn)行WMV苗期鑒定，發(fā)現(xiàn)FI全感病，以65G回交的群體全感病，以228回交的群體一半感病、一半抗病，F(xiàn)2感病與抗病比為3∶1。試驗表明，該遺傳群體對WMV的抗性是由隱性單基因控制的。
　　 2.根據(jù)前人研究結(jié)果和黃瓜基因組序列綜合分析，挑選黃瓜6號染色體上的243對SSR引物，再結(jié)合BSA法進(jìn)行分析，獲得具有多態(tài)性的引

3、物111對，引物多態(tài)性為45.7％。BSA建池篩選后，初步獲得20對標(biāo)記可能與wmv連鎖，通過Joinmap4.0做連鎖圖，最終將wmv定位在黃瓜6號染色體上，wmv位于標(biāo)記SSR17604和SSR17591之間，遺傳距離分別為5.6cM和25.8cM。根據(jù)前人研究和本課題現(xiàn)有的標(biāo)記在wmv初定位區(qū)間尋找并增加6個新標(biāo)記后，wmv被進(jìn)一步定位到SSR10449和SSR16005之間，遺傳距離分別是2.9cM和0.3cM。
　　

4、3.對SSR16005和SSR10449之間的序列進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)wmv定位區(qū)域的物理距離約為416.5Kb，定位區(qū)間有88個候選基因，其中5個與抗病基因相關(guān)。
　　 4.利用獲得的與wmv緊密連鎖的3個側(cè)翼標(biāo)記SSR16005、SSR10449和UW016108對28個不同遺傳背景的黃瓜材料進(jìn)行驗證，結(jié)果SSR16005的準(zhǔn)確率為78.5％，SSR10449和UW016108的準(zhǔn)確率均為89.3％。使用三個標(biāo)記相互印證進(jìn)行驗證的