十萬(wàn)大山25種植物抑菌除草活性篩選.pdf

1、本研究對(duì)采自廣西十萬(wàn)大山的15科25種植物，分別通過(guò)刃天青微量檢測(cè)法、抑菌圈法、菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了其甲醇粗提物對(duì)茄青枯拉爾氏菌Ralstoniasolaanacearum和立枯絲核菌Rhizoctonia solani的抑菌活性，以96孔瓊脂板除草活性微量篩選法測(cè)定了其甲醇粗提物的除草活性；通過(guò)優(yōu)化篩選條件，探索了適合于植物粗提物活性的微量篩選方法；在活性跟蹤的基礎(chǔ)上對(duì)馬錢(qián)子和硫磺菊進(jìn)行了活性成分分離。
　　 1、以茄青枯拉爾

2、氏菌為靶標(biāo)，通過(guò)刃天青微量檢測(cè)法，對(duì)25種植物甲醇粗提物進(jìn)行活性篩選，結(jié)果顯示所有供試植物均對(duì)靶標(biāo)菌產(chǎn)生一定程度的陽(yáng)性反應(yīng)，其中山風(fēng)Blumea aromatica、千斤拔 Flemingia prostrata、穿破石Macluracochinchinensis、長(zhǎng)莖金耳環(huán)Asarum longerhizomatosum、馬錢(qián)子Strychnosnux-vomica、硫磺菊Cosmos sulphurens、地皮Illicium d

3、ifengpi、白花蛇舌草Heayotisdiffusa、紅花青藤I(mǎi)lligera rhodantha、白花丹Plumbagozeylanica等10種植物甲醇粗提物的抑菌活性顯著，其中山風(fēng)、千斤拔、穿破石、長(zhǎng)莖金耳環(huán)、馬錢(qián)子、硫磺菊的MIC值分別為：0.50、0.75、1.00、3.00、4.00、8.00 mg/ml；抑菌法測(cè)定結(jié)果同樣表明：山風(fēng)、千斤拔、白花蛇舌草、馬錢(qián)子、山豆根、穿破石的甲醇粗提物生物活性最為顯著，其中山風(fēng)和千斤

4、拔在300 mg/ml濃度下，抑菌圈直徑分別為1.38cm和1.33cm。以立枯絲核菌為靶標(biāo)，采用菌絲生長(zhǎng)速率法，進(jìn)一步對(duì)抑制細(xì)菌活性高的10種植物進(jìn)行抑制真菌活性測(cè)定，結(jié)果顯示，在供試樣品為3mg/ml濃度下，長(zhǎng)莖金耳環(huán)、地楓皮、馬錢(qián)子、硫磺菊對(duì)供試菌活性最顯著，其EC50值分別為：0.93、0.64、1.18、1.99 mg/ml。以甜菜心、狼尾草、蘿卜種子為靶標(biāo)，采用優(yōu)化了的96孔瓊脂板除草活性微量篩選法測(cè)定結(jié)果表明硫磺菊和馬錢(qián)子

5、具有顯著除草活性。
　　 2、以茄青枯拉爾氏菌為靶標(biāo)菌，比較刃天青微量篩選法和抑菌圈法對(duì)植物粗提物抑菌活性情況，結(jié)果顯示刃天青法以低于抑菌圈法100～1000倍的藥液濃度，得到了高于抑菌圈法12％的篩選率，結(jié)果表明，刃天青微量篩選法可以有效的避免活性植物的漏篩選。以植物種子為靶標(biāo)植物，通過(guò)對(duì)溶劑種類及濃度、浸種時(shí)間、藥品添加方式以及植物活性評(píng)價(jià)指標(biāo)四個(gè)因素，對(duì)96孔瓊脂板除草活性微量篩選法進(jìn)行條件探索，結(jié)果表明：以2％-4％的甲

6、醇做溶劑，浸種催芽12h，以苗高抑制率為活性測(cè)定指標(biāo)，用帶藥瓊脂法加藥為植物除草活性篩選的最佳篩選條件，以96孔板為介導(dǎo)的微量篩選法在篩選植物除草活性時(shí)具有直觀、可靠、快速、靈敏、微量、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)。
　　 3、綜合利用硅膠柱層析、ODS、Sephadex LH-20等分離方法，分別對(duì)馬錢(qián)子和硫磺菊進(jìn)行活性成分分離純化，結(jié)果從馬錢(qián)子中分得6個(gè)化合物，其中2個(gè)化合物鑒定結(jié)構(gòu)為生物堿類物質(zhì)偽馬錢(qián)子堿和蒽醌衍生物大黃素，從硫磺菊中分離出

7、15個(gè)初步提純物，結(jié)構(gòu)待鑒定。
　　 本研究通過(guò)比較抑菌活性測(cè)定方法，探明了刃天青微量篩選法可以有效的避免植物粗提物活性的漏篩；建立了以96孔瓊脂板除草活性微量篩選法對(duì)植物粗提物活性的篩選模型：并應(yīng)用此模型從25種廣西植物中篩選出若干對(duì)單一指示生物活性顯著的植物品種，并首次報(bào)道這類植物品種在植物源抑菌、除草劑開(kāi)發(fā)方面的研究潛力；此外，從馬錢(qián)子和硫磺菊中共分離出21個(gè)初步提純物，并鑒定了兩個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)。研究為綜合評(píng)價(jià)植物粗提物活