西瓜抗炭疽病基因的分子標(biāo)記研究.pdf

1、西瓜[Citrullus lanatus(Thunb.) Matsum&Nadai]是一種世界性的園藝作物，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中占有重要地位。隨著西瓜栽培面積尤其是設(shè)施栽培面積的迅速增加，西瓜的病危害加劇。
　　西瓜炭疽病是由瓜類炭疽病菌[Colletotrichum lagenerium(Pass.)Ell.et Halst]引起的真菌性病害，在許多國家都有發(fā)生，該病害已成為影響西瓜產(chǎn)量和質(zhì)的主要因素之一。防治該病害最有效的方法是培育抗

2、病新品種。分子標(biāo)記輔助選擇育種可以加速新品種的選育。因此，利用分子標(biāo)記技術(shù)篩選到與抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記對育種有重要意義。
　　目前，西瓜炭疽病的分子標(biāo)記研究方面報道很少，本實驗以抗病母本PI189225和感病父本Black Diamond及其構(gòu)建的F1、F2代群體為研究材料，通過對親本、F1、F3代243個株系進(jìn)行西瓜炭疽病抗性苗期接種鑒定，對抗性進(jìn)行了遺傳性分析;采用AFLP和SSR兩種分子標(biāo)記相結(jié)合對西瓜抗炭疽病基因進(jìn)行

3、分析，獲得與抗病基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，為西瓜炭疽病分子標(biāo)記輔助選擇育種提供了良好基礎(chǔ)。本論文的研究內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　1、本研究選取抗西瓜炭疽病的PI189225和感西瓜炭疽病的Black Diamand為親本材料，及其有性雜交的F2分離世代為試驗材料。通過對F3代群體苗期接菌鑒定得到PI189225×Black Diamond的F2代抗感分離情況，F(xiàn)2分離群體中抗病與感病的分離符合3∶1的分離比率，初步表明西瓜炭疽病抗性基因

4、為顯性單基因控制。
　　2、以改良的CTAB法提取高質(zhì)量的西瓜基因組DNA，根據(jù)試驗條件進(jìn)行AFLP技術(shù)體系優(yōu)化，通過優(yōu)化模板量、酶切、連接、預(yù)擴(kuò)增選等關(guān)鍵試驗步驟，建立適合西瓜基因組AFLP分析的技術(shù)體系:500ng的西瓜基因組DNA，用10UEcoR I和5U Mse I37℃雙酶切4h;連接反應(yīng)于16℃下連接4h;預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物最佳稀釋10倍。
　　3、利用AFLP和SSR技術(shù)尋找與西瓜抗炭疽病基因相關(guān)的分子標(biāo)記，32條E