茯苓性不親和模式的初步研究.pdf

1、茯苓[Wolfiporia cocos(Schwein.)Ryvarden&Gilb.]是我國傳統(tǒng)的藥材之一，屬于多孔菌科(Polyporaceae)茯苓屬(Wolfiporia)，以其干燥的菌核入藥，在中藥炮制中配伍率極高。茯苓基礎研究嚴重滯后，茯苓性模式及生活史目前仍無定論，致使茯苓育種仍停留于從野生或馴化菌株中進行選擇的水平，同質化現(xiàn)象嚴重，生產(chǎn)上常因菌種退化造成重大的經(jīng)濟損失。究其原因，一是茯苓子實體形成極具偶然性，易受菌株特性

2、和培養(yǎng)條件的影響：二是茯苓菌絲細胞多核且無鎖狀聯(lián)合，不同核相的菌絲在形態(tài)上基本相似，無法從形態(tài)上加以區(qū)分，也缺少有效的檢測技術手段。本人在實驗室條件下對茯苓菌絲體進行了子實體誘導試驗，對形成的子實體進行了超微結構觀察，在此基礎上，以栽培菌株L的11株原生質體再生菌株及多個單孢菌株為材料，通過系列配對和結實試驗，對茯苓的性模式進行了探討。
　　 在茯苓子實體誘導試驗中，通過適宜溫濕度條件下的長時間培養(yǎng)、光照誘導及通過轉接處理的損失

3、誘導的方法誘導茯苓子實體的形成。結果表明，武漢地區(qū)在4、5月份的時間段室溫(溫度范圍20℃-30℃)培養(yǎng)茯苓子實體，子實體的形成隨機性較強，形成幾率較低；采用光照誘導法，黑暗培養(yǎng)一段時間后，再進行光暗交替培養(yǎng)，可提高茯苓子實體形成率；損傷誘導法可控性較強，菌株L經(jīng)30 d以上的黑暗培養(yǎng)，再將其轉入新的培養(yǎng)基中進行光暗交替培養(yǎng)，子實體形成的幾率較高。
　　 在茯苓子實體超微結構觀察試驗中，進行了冷凍切片、掃描電子顯微鏡和透射電子顯

4、微鏡觀察。結果顯示，茯苓子實體外表面由擔子層覆蓋，內部為致密的菌髓，菌髓細胞均含有1-2個大囊泡，存在二叉分支結構。擔子由菌絲頂端細胞形成，頂端細胞無色透明，緊密排列，菌絲排列與擔子層近垂直。其擔子果為裸果型，子實層為兩側型，絕大多數(shù)擔子上著生4個擔孢子，有極少數(shù)擔子上著生3個擔孢子。擔孢子著生處有縊縮，擔孢子發(fā)育不同步。
　　 在配對試驗及結實試驗中，以茯苓菌株L、菌株L的11株原生質體再生菌株及52個菌株L的單孢分離菌株為試

5、驗材料，進行了菌株L原生質體再生菌株與菌株L單孢菌株之間的對峙培養(yǎng)試驗、單孢菌株與其親本菌株L的對峙培養(yǎng)試驗、單孢菌株間的配對試驗、以及表現(xiàn)為可和諧生長的單孢配對交接處菌絲體與菌株L及兩個親本單孢菌株的對峙培養(yǎng)試驗。綜合分析以上單孢配對和體細胞不親和反應類型，選取B18和B20這2個典型可配對成功的菌株作為測試菌株，對50個單孢菌株的交配型進行了鑒定，結果表明，茯苓單孢菌株有2種不同交配型因子，經(jīng)X2驗證，2種不同交配型因子單孢菌株數(shù)量