兔MC1R基因克隆、遺傳變異及不同時(shí)期表達(dá)水平的研究.pdf

1、哺乳動(dòng)物的毛色類型很多，主要是由黑色素細(xì)胞產(chǎn)生的黑色素的不同分布所引起。家兔作為毛皮獸類，毛皮顏色不僅是品種的標(biāo)記，更具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
　　 MC1R(me1anocortin1-receptor)基因，即黑色素皮質(zhì)素受體1，該基因存在于哺乳動(dòng)物的黑色素細(xì)胞中，哺乳動(dòng)物的有色毛表型受黑色素皮質(zhì)素受體1位點(diǎn)的不同等位基因調(diào)節(jié)。MC1R是是獨(dú)特的、雙功能控制受體，黑色素細(xì)胞接受動(dòng)物激素調(diào)控的主要受體之一，MC1R基因?yàn)镚蛋白偶聯(lián)

2、受體家族成員，由extension基因座編碼，長(zhǎng)度為310個(gè)氨基酸。MC1R基因只有一個(gè)外顯子，其蛋白有7個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，為最小的G蛋白偶聯(lián)受體。在哺乳動(dòng)物中，MC1R對(duì)于黑色素的形成有著重要的調(diào)節(jié)作用，是目前研究發(fā)現(xiàn)與黑色素的形成有著直接關(guān)系的基因。
　　 本實(shí)驗(yàn)以4個(gè)兔品種為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，對(duì)兔MC1R基因外顯子進(jìn)行克隆測(cè)序，得到外顯子核苷酸序列，基于NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)上發(fā)表的其他物種MC1R核苷酸序列進(jìn)行生物學(xué)比對(duì);利用PCR-SSC

3、P技術(shù)對(duì)4個(gè)兔品種MC1R基因外顯子進(jìn)行多態(tài)性分析和比較;同時(shí)采用熒光定量PCR技術(shù)分析MC1R基因在兔體內(nèi)的不同時(shí)期表達(dá)規(guī)律，主要研究結(jié)果如下:
　　 1、根據(jù)GenBank中公布的狒狒MC1R基因外顯子序列B1ast，設(shè)計(jì)引物，獲得兔MC1R基因外顯子區(qū)域核苷酸序列，并與GenBank中其他物種的相應(yīng)基因編碼區(qū)核苷酸序列進(jìn)行比較分析，采用鄰接法構(gòu)建兔與其他物種間分子系統(tǒng)進(jìn)化樹。結(jié)果表明，長(zhǎng)度為924bp的兔MC1R基因編碼區(qū)

4、序列與人、狒狒等靈長(zhǎng)類動(dòng)物的同源性分別為88.3％、88.7％，與豬和牛等偶蹄目的同源性分別為88.1％、87.4％，與鼠、小鼠等嚙齒目動(dòng)物的同源性分別為83.4％、86.1％。將核苷酸序列翻譯成氨基酸，并預(yù)測(cè)其構(gòu)成的蛋白信息得知:堿基A、T、C、G數(shù)目分別為232、225、237、230;α-螺旋占42.3％，無(wú)規(guī)卷曲占37.5％，β-轉(zhuǎn)角占11.3％;預(yù)測(cè)氨基酸殘基涵蓋4個(gè)親水區(qū)和3個(gè)疏水區(qū)。
　　 2、在閩西南黑兔、青紫藍(lán)

5、色獺兔、白色獺兔和九疑山兔4個(gè)兔品種中對(duì)MC1R基因外顯子進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性分析，檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)了2個(gè)等位基因、3種基因型，外顯子區(qū)域103-108位點(diǎn)存在AGACGG插入。4個(gè)兔品種的雜合度都在0.140-0.251之間，多態(tài)信息含量在0.15左右。A等位基因在白色獺兔、九疑山兔群體中表現(xiàn)為優(yōu)勢(shì)等位基因;B等位基因在閩西南黑兔、青紫藍(lán)色獺兔群體中表現(xiàn)為優(yōu)勢(shì)等位基因。通過蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)，該插入突變使得蛋白質(zhì)構(gòu)象發(fā)生微弱改變，可能會(huì)相應(yīng)