利用雙T-DNA載體選育含有耐貯基因獼猴桃的研究.pdf

1、紅陽獼猴桃是原產(chǎn)于我國的一種紅心中華獼猴桃。因其肉質(zhì)鮮美,營養(yǎng)豐富,口感極佳,具有極高的商業(yè)價(jià)值。但紅陽獼猴桃果實(shí)成熟后常溫下儲存期極短,一般不足一個星期就開始潰爛,經(jīng)常使果農(nóng)和商家蒙受巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為了建立獼猴桃基因功能研究技術(shù)平臺,并通過生物技術(shù)改良紅陽獼猴桃,本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了一個雙T-DNA載體pCAMBIA1300-ACO-actin-term,載體中兩個T-DNA結(jié)構(gòu)順序相連,兩條不同T-DNA區(qū)上分別有標(biāo)記基因hpt和目的基因

2、ACO,中間沒有其他插入序列。將鑒定正確的反義表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌EHA105。采用葉盤轉(zhuǎn)化法通過根癌農(nóng)桿菌EHA105菌株介導(dǎo),將ACO反義基因?qū)爰t陽獼猴桃中,得到再生植株。并對再生植株進(jìn)行PCR檢測,PCR法檢測證明ACO反義基因已轉(zhuǎn)入轉(zhuǎn)化植株基因組中。本研究在世界上首次使用雙T-DNA載體將含有獼猴桃的ACO基因的反義表達(dá)載體成功轉(zhuǎn)入中華獼猴桃,并獲得了再生植株。為下一步從轉(zhuǎn)化的再生植株分離的后代中,選育無篩選標(biāo)記的耐貯轉(zhuǎn)基因紅