嗜堿芽孢桿菌N16-5堿性β-甘露聚糖酶的嗜堿機(jī)制研究.pdf

1、蛋白質(zhì)在堿性條件下保持活力和穩(wěn)定性機(jī)制是蛋白質(zhì)工程中的研究熱點(diǎn)，但由于涉及到的機(jī)理復(fù)雜，對其研究還很少，本研究以嗜堿芽孢桿菌N16-5產(chǎn)生的嗜堿β-甘露聚糖酶為研究材料，對蛋白質(zhì)在堿性條件下保持活力和穩(wěn)定性的的嗜堿機(jī)制進(jìn)行了初步研究。　　本研究首先對從嗜堿芽孢桿菌N16-5基因組中分離得到的嗜堿β-甘露聚糖酶基因進(jìn)行亞克隆，以pUC18為克隆和表達(dá)載體構(gòu)建突變體庫。使用dCTP和dTTP-豐富的dNTP混合物和含有高濃度Mg2+的PC

2、R緩沖液進(jìn)行易錯(cuò)PCR，構(gòu)建突變體文庫，通過高通量的篩選方法，篩選得到一個(gè)最適pH發(fā)生改變的突變體，對其一級結(jié)構(gòu)和空間結(jié)構(gòu)的變化進(jìn)行了測定和預(yù)測，一級結(jié)構(gòu)測定表明共有兩個(gè)突變位點(diǎn)變化，為了分析是單個(gè)的位點(diǎn)的變化導(dǎo)致的酶的特性變化，還是二者共同作用導(dǎo)致的，構(gòu)建了單一突變的嵌和體，結(jié)果發(fā)現(xiàn)是甘氨酸(A)到纈氨酸(Ⅴ)的變化導(dǎo)致了突變體酶分子的最適pH發(fā)生了變化?？臻g結(jié)構(gòu)的預(yù)測表明可能是由于分子表面兩個(gè)螺旋減少，導(dǎo)致的該特性的變化。　　從該