附iso846譯文全本

1、<p>　　塑料—微生物行為的測定</p><p>　　目錄 頁碼</p><p>　　簡介 iv </p><p>　　1范圍 ?

2、 1</p><p>　　2引用標(biāo)準(zhǔn) 2</p><p>　　3定義 2</p><p>　　4原理

3、 2</p><p>　　5設(shè)備及原料 3</p><p>　　6實驗樣品 7</p><p>　　7樣品制備 8</p><p>　　8

4、方法 9</p><p>　　9評定 14</p><p>　　10實驗結(jié)果 16</p><p>　　11測定準(zhǔn)確性

5、 17</p><p>　　12實驗報告 17</p><p>　　13參考資料 18</p><p><b>　　附錄</b></p><p>　　A 土壤含水量和持水量的測定

6、 19</p><p>　　B 精密度 21</p><p>　　C 實驗真菌資料 22</p><p><b>　　前言</b></p><p>　　ISO(國際標(biāo)準(zhǔn)化組織)

7、是由各國標(biāo)準(zhǔn)化團體(ISO成員)組成的世界性的聯(lián)合體。國際標(biāo)準(zhǔn)的制定工作通常由ISO技術(shù)委員會來進行。對技術(shù)委員會確立的項目感興趣的各成員團體,，均有權(quán)參加該委員會的工作。與ISO保持聯(lián)系的各國際組織(官方的或非官方的)也可參加有關(guān)工作。在電工技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化方面ISO與國際電工技術(shù)委員會(IEC)保持密切合作關(guān)系。</p><p>　　被技術(shù)委員會采納的國際標(biāo)準(zhǔn)草案需經(jīng)成員團體進行表決。國際標(biāo)準(zhǔn)至少需75%參加表決的

8、成員團體的同意才能發(fā)布。</p><p>　　國際標(biāo)準(zhǔn)ISO846是由ISO/TC61技術(shù)委員會制定的 ,，SC6分委員會主要從事制訂塑料的老化和耐化學(xué)與環(huán)境特性標(biāo)準(zhǔn)的工作。</p><p>　　第二版對第一版進行了技術(shù)上的修訂,，對第一版(ISO846:1978)的內(nèi)容進行了刪除和補充。</p><p>　　為了驗證實驗結(jié)果的重復(fù)性,，IBRG(國際生物劣化研究小

9、組)中的塑料工程會在1984至1990年間,，使用本標(biāo)準(zhǔn)的1978年版,，在幾個實驗室之間進行了平行實驗,，從實驗中得到的經(jīng)驗都被綜合進現(xiàn)在的版本中。而且,，8.5分款引入了由瑞士人St.Gallen所著的Eidgenssische Materialprfungsanstalt書中所述的土壤填埋實驗方法。</p><p>　　附錄A形成了本國際標(biāo)準(zhǔn)的主要部分,，附錄B和C僅供參考。</p><

10、p><b>　　簡介</b></p><p>　　在一定的氣候和環(huán)境條件下,，微生物能在塑料或塑料制品的表面生長繁殖。它們和(或)它們的代謝產(chǎn)物不僅能破壞塑料本身,，也可能影響到建筑材料和包含有塑料部件的系統(tǒng)的使用可靠性。</p><p>　　本標(biāo)準(zhǔn)所描述的實驗和實驗條件是以實驗為基礎(chǔ)的,，它包括了大部分但并非所有的潛在的應(yīng)用情況。</p><

11、;p>　　對于特殊應(yīng)用和長期實驗,，以及實驗工藝應(yīng)該與在此條件下反映的特性相一致。 </p><p>　　塑料上的微生物的行為受下述兩種不同過程影響:</p><p>　　a)直接作用:由于塑料發(fā)生劣化,，為微生物的生長提供了營養(yǎng)物質(zhì)。</p><p>　　b)間接作用:微生物的代謝產(chǎn)物所產(chǎn)生的影響,，如變色或進一步</p><p>&

12、lt;b>　　劣化。</b></p><p>　　本國際標(biāo)準(zhǔn)涉及這兩種過程以及它們的復(fù)合作用。</p><p>　　塑料—微生物行為的測定</p><p>　　注意—觸摸和使用微生物有潛在的危險性,，它需要較高程度的</p><p>　　技術(shù)能力,，而且可能須符合現(xiàn)行的國家法律和章程。只有在微生物技術(shù)方面經(jīng)過培訓(xùn)的人員才能進

13、行這些實驗,，有關(guān)消毒、滅菌和個人保健方面操作的標(biāo)準(zhǔn)章程必須嚴(yán)格遵守。</p><p>　　建議工作人員參考IEC678-2-10:1988,，附錄A“工作人員安全守則”和ISO7218:1996食品和動物飼料添加劑微生物學(xué)—微生物檢測通則等三個基本標(biāo)準(zhǔn)。</p><p><b>　　1.、范圍</b></p><p>　　本標(biāo)準(zhǔn)描述了由于真菌

14、、細(xì)菌和土壤微生物的作用導(dǎo)致塑料劣化的測定方法,，其目的不是確定塑料的生物降解能力。</p><p>　　劣化的類型和程度可以用下列方法確定。</p><p><b>　　a)目測</b></p><p><b>　　和(或)</b></p><p><b>　　b)質(zhì)量變化</b&

15、gt;</p><p><b>　　和(或)</b></p><p>　　c)其他物理性質(zhì)參數(shù)的變化</p><p>　　本實驗適用于所有具有平坦表面因而容易清洗的塑料制品。多</p><p>　　孔材料如泡沫塑料除外。</p><p>　　本國際標(biāo)準(zhǔn)使用與IEC68-2-10中一樣的實驗真菌及I

16、EC中所謂的“群樣法”即使用孢子懸浮液來接種樣品,，然后對接種樣品培養(yǎng)。該方法除了測定樣品的物性破壞外,，還對真菌生長進行評定。</p><p>　　實驗用量及實驗所用菌種依賴于塑料的預(yù)計用途,，這些參數(shù)在實驗前要被認(rèn)可且應(yīng)在實驗報告中注明。</p><p><b>　　2.引用標(biāo)準(zhǔn)</b></p><p>　　下列標(biāo)準(zhǔn)所包含的條文,，通過在本

17、標(biāo)準(zhǔn)中引用而構(gòu)成為本標(biāo)準(zhǔn)的條文。本標(biāo)準(zhǔn)出版時,，所示版本均為有效。所有標(biāo)準(zhǔn)都會被修訂,，使用本標(biāo)準(zhǔn)的各方應(yīng)探討使用下列標(biāo)準(zhǔn)最新版本的可能性。IEC和ISO的成員應(yīng)保存現(xiàn)行的有效的國際標(biāo)準(zhǔn)。</p><p>　　ISO291: 塑料—調(diào)節(jié)和實驗的標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境</p><p>　　IEC68-2-10:實驗過程的基本環(huán)境—第二部分:實驗—實驗J和導(dǎo)引:霉菌生長</p><p&g

18、t;<b>　　3.定義</b></p><p><b>　　本標(biāo)準(zhǔn)采用下列定義</b></p><p>　　3.1 生物劣化:由于微生物的作用使材料發(fā)生化學(xué)或物理性質(zhì)的變化。</p><p>　　3.2 2抑真菌作用:在潮濕條件下,，由于抗菌素的作用,，可以阻止材料上</p><p><

19、b>　　真菌過度生長。</b></p><p>　　3.3 3生物降解:生物降解這一條款由TC61/SC5/WG22討論,，如果有效,，</p><p>　　本文中包含生物降解力的正式定義。</p><p><b>　　4.原理</b></p><p>　　4.1 實驗包括在規(guī)定的溫度和濕度條件下,

20、，在規(guī)定的或一致認(rèn)定的時間段內(nèi),，使實驗樣品暴露在選定的真菌和細(xì)菌等實驗菌種作用環(huán)境下(或者,，在土壤添埋實驗中,，暴露在細(xì)菌性活性土壤中)。</p><p>　　在實驗之后,，通過目測可以估計樣品清洗前、后外觀上的變化，也可以確定在外觀,和(或)質(zhì)量或其它物理性質(zhì)參數(shù)的變化。</p><p>　　將在相同實驗條件下,，受到微生物腐蝕的樣品(I組)同未處理的樣品(O組)或滅菌樣品(S組)的

21、實驗結(jié)果進行比較。</p><p>　　4.2 2下面簡單描述了確定塑料抵抗真菌(方法A)、或霉菌(方法B和B’),、細(xì)菌(方法C)和土壤微生物(方法D)作用的實驗方法。</p><p>　　4.2.1 耐真菌作用特性</p><p>　　4.2.1.1 方法A:真菌生長實驗</p><p>　　實驗樣品放到含有非完全培養(yǎng)基(沒有碳源)

22、的真菌孢子混合懸浮液里,，真菌只有通過消耗物質(zhì)才能生長,，假如樣品中無營養(yǎng)成分,，真菌不能繁殖,，塑料也就不會劣化。</p><p>　　方法A適用于評價在無其它有機物存在下塑料固有的抗真菌作用的能力。</p><p>　　建議進行方法A時,，也可結(jié)合方法B和B＇有助于結(jié)果的解釋。</p><p>　　4.2.1.2 方法B和B＇:抗霉菌作用的測定</p&g

23、t;<p>　　實驗樣品放到含有完全培養(yǎng)基的(即有碳源)真菌孢子混合懸浮液中,，即使塑料不含任何營養(yǎng),，真菌也能在樣品上生長且它們的代謝產(chǎn)物也對塑料有破壞作用。</p><p>　　塑料上或培養(yǎng)基(抑菌區(qū)域))霉菌生長的抑制,，顯示出塑料固有的作用經(jīng)抑霉菌處理特性或塑料的經(jīng)抑霉菌處理的作用。</p><p>　　方法B＇中,，樣品在完全生長過度后才能被放入培養(yǎng)基中。</

24、p><p>　　當(dāng)材料表面受到污染時,，可使用方法B和B＇。為了節(jié)省時間和更好地理解這一現(xiàn)象,，建議兩種方法同時進行。</p><p>　　4.2.2 方法C:耐細(xì)菌特性作用</p><p>　　利用一非完全營養(yǎng)介質(zhì)評價細(xì)菌對實驗試樣的作用。假如樣品周圍瓊脂內(nèi)沒有細(xì)菌生長，那麼,，樣品也就不含任何營養(yǎng)成分。</p><p>　　4.2.3 方

25、法D:耐細(xì)菌性活性土壤特性(土壤填埋實驗)</p><p>　　實驗樣品完全埋在已知持水量持水力和特定含水量的天然土壤中(見附錄A)。</p><p>　　由于許多塑料與土壤永久接觸并暴露在高濕度的環(huán)境中,，因此本標(biāo)準(zhǔn)也包括介紹了土壤填埋實驗。</p><p>　　4.3 生物劣化評價的參數(shù)的選擇</p><p>　　參數(shù)的選擇由實驗?zāi)康乃?/p>

26、決定,，在塑料抗力評價的第一階段，微生物作用的評價方法最好選目測方法。</p><p>　　尤其對含有生物降解成分,，如增塑劑,，潤滑劑和穩(wěn)定劑(例如,，在增塑的PVC)的那些塑料,，建議測定質(zhì)量變化。因為生物降解物質(zhì)僅僅被部分利用且代謝產(chǎn)物通常保留在塑料中時,，這種情況下,，測量的失重通常小于實際失重。</p><p>　　另外,，尤其是當(dāng)塑料表面已受到作用時,，建議測定那些能清楚地反映

27、塑料表面變化的那些性質(zhì),，如表面光澤,，彎曲性能,，抗沖擊性和硬度。</p><p><b>　　5.設(shè)備及材料</b></p><p>　　5.1 適用于所有實驗</p><p>　　5.1.1 細(xì)菌培養(yǎng)箱</p><p>　　用于真菌和細(xì)菌作用實驗時,，細(xì)菌培養(yǎng)箱溫度可控制在在20～35℃間任何溫度下，控制精度可

28、到±1℃,， RH相對濕度（相對濕度RH）為90%或更高。</p><p>　　如用于土壤填埋實驗,，則細(xì)菌培養(yǎng)箱溫度可控制在在29℃，控制精度±1℃,，相對濕度為95%或更高。</p><p>　　注:：經(jīng)驗表明,，使用兩個細(xì)菌培養(yǎng)器更可取,，一個用于培養(yǎng)皿實驗,，一個用于土壤填埋實驗。</p><p>　　5.1.2 干燥箱,，能在45℃控

29、溫用于干燥實驗樣品；,在103～105℃控溫,</p><p>　　用于測量土壤持水量持水力。</p><p>　　5.1.3 干燥劑,，能保持標(biāo)準(zhǔn)溫度和濕度條件(23℃和50%RH)用于實驗和控制樣品的條件。</p><p>　　5.1.4 高壓消毒蒸鍋,，能保持溫度和壓力分別為120℃,，2bar,，用于培養(yǎng)</p><p><

30、b>　　皿和土壤的滅菌。</b></p><p>　　5.1.5 分析天平,，精確到0.1mg。</p><p>　　5.1.6 離心過濾機</p><p>　　5.1.7 體視顯微鏡,，放大倍數(shù)50倍。</p><p>　　5.1.8 由玻璃或塑料材質(zhì)制造的易處理的培養(yǎng)皿,，該培養(yǎng)皿具有合適的尺寸用于樣品的暴露實驗

31、。</p><p>　　5.1.9 玻璃容器,，體積約1升(高16cm,，直徑11cm),，如帶蓋子的保鮮瓶。</p><p>　　5.1.10 蒸餾水或去離子水</p><p>　　用于配制所有溶液和培養(yǎng)基及所有測定所需的水,，必須是導(dǎo)電率＜1s/cm的蒸餾水或去離子水。</p><p>　　5.1.11 殺菌液</p>

32、<p>　　5.1.11.1 乙醇—水混合物,，重量比70:30</p><p>　　5.1.11.2 鄰苯基苯酚</p><p>　　50ml90%乙醇中溶解1g鄰苯基苯酚,，用水配至1000ml,，滴加乳酸調(diào)PH至3.5,，使用的殺菌液應(yīng)在實驗報告中注明。</p><p><b>　　5.2 真菌實驗</b></p&

33、gt;<p>　　5.2.1 實驗真菌</p><p>　　實驗真菌應(yīng)從國家培植物標(biāo)本中獲得,，使用的菌種在表1中列出,，在實驗報告中注明。</p><p><b>　　表 1</b></p><p>　　如果由于技術(shù)原因,， 經(jīng)對此感興趣的成員團體協(xié)商經(jīng)許可后,，可使用其它種類的菌種,，這種情況下也應(yīng)該在實驗報告中注明所用菌種

34、。</p><p>　　在用作電子元件和電子設(shè)備的塑料上進行實驗時,，使用IEC68-2-10描述的方法,，使用表1中的Aspergillus niger,，Penicillium funiculosum,，Paecilomyces variotii和Gliocladium virens菌種和表2中的四種菌種。</p><p><b>　　。</b></p>

35、;<p><b>　　表 2</b></p><p>　　5.2.2 標(biāo)準(zhǔn)菌種</p><p>　　在試管里于瓊脂斜面上對實驗真菌(5.2.1)進行培養(yǎng),，瓊脂成分如下:</p><p>　　麥片粥 20g</p><p>　　麥芽浸膏 10g</p><p&g

36、t;　　瓊脂 20g </p><p>　　水 1000ml</p><p>　　在高壓消毒蒸鍋中于飽和蒸汽壓下在120℃±1℃條件下滅菌20分鐘。在29℃±1℃或24℃±1℃溫度下進行細(xì)菌培養(yǎng)之后,，形成可供使用芽孢。在上述溫度下此芽孢的儲存不應(yīng)超過4周。</p><p>　　人造培養(yǎng)基上，由于實驗真

37、菌在培養(yǎng)過程中有發(fā)生遺傳學(xué)和生理學(xué)變化的可能性,，因此兩代培養(yǎng)的時間間隔須通過適當(dāng)?shù)姆绞?如培養(yǎng)物的冷凍脫水,，在+4℃或液氮中儲存)縮短到最小。</p><p>　　5.2.3 溶液和培養(yǎng)基</p><p>　　5.2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)無機鹽溶液,，成分如下(僅能使用分析純或相當(dāng)純度的化學(xué)藥品):</p><p>　　NaNO3 2.0

38、g</p><p>　　KH2PO4 0.7g</p><p>　　K2HPO4 0.3g</p><p>　　KCl 0.5g</p><p>　　MgSO4.7H2O 0.5g</p><p>　　FeSO4.7H2O

39、 0.01g</p><p>　　H2O 1000ml</p><p>　　用0.01mol/l無菌NaOH溶液調(diào)節(jié)PH值至6.0～6.5。</p><p>　　5.2.3.2 無機鹽/潤濕劑溶液,，把0.1g無毒的潤濕劑如N-甲基牛黃酸或</p><p>　　聚乙二醇醚加到1L標(biāo)準(zhǔn)無機鹽溶液(5.2.3.

40、1)中,，在高壓消毒蒸鍋中于120℃±1℃的溫度下滅菌20分鐘。</p><p>　　5.2.3.3 無機鹽/葡萄糖溶液,，把足量的葡萄糖溶液加到標(biāo)準(zhǔn)的無機鹽溶液(5.2.3.1)中,，得到濃度為30g/l±1g/l溶液,，在高壓消毒蒸鍋中于115℃±1℃的溫度下滅菌30分鐘。</p><p>　　5.2.3.4 不非完全瓊脂培養(yǎng)基,，把足量的瓊脂加到標(biāo)準(zhǔn)

41、的無機鹽溶液(5.2.3.1)中,，得到濃度20g/l溶液,，邊煮邊攪拌溶液以使瓊脂溶解,，在高壓消毒蒸鍋中于120℃±1℃的溫度下滅菌20分鐘。滅菌之后,，用0.01mol/l無菌NaOH溶液調(diào)節(jié)PH值至6.0～6.5。</p><p>　　5.2.3.5 完全瓊脂培養(yǎng)基,，把足量的葡萄糖溶液加到不非完全瓊脂培養(yǎng)</p><p>　　基中,，得到濃度30g/l±1g

42、/l溶液,，在高壓消毒蒸鍋中于115℃±1℃的溫度下滅菌30分鐘。滅菌之后,，在20℃用0.01mol/l無菌NaOH溶液調(diào)節(jié)PH值至6.0～6.5。</p><p><b>　　5.3 細(xì)菌實驗</b></p><p>　　5.3.1 實驗用細(xì)菌:Pseudomonas aeruginosa,，NCTC 8060或ATCC 13388</p>

43、;<p><b>　　菌種。</b></p><p>　　細(xì)菌實驗中嚴(yán)格規(guī)定菌種應(yīng)從國家細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本中得到,，實驗菌種在細(xì)菌瓊脂培養(yǎng)基(5.3.2.1)上培養(yǎng)。</p><p>　　另外,，如經(jīng)許可也可使用其它實驗細(xì)菌,，這一點在實驗報告中應(yīng)注明。</p><p>　　5.3.2 培養(yǎng)基和溶液</p><p&

44、gt;　　5.3.2.1 細(xì)菌瓊脂培養(yǎng)基</p><p>　　酪蛋白大豆胨瓊脂可作為一種可供選擇的對象。</p><p>　　培養(yǎng)基可從工業(yè)品供應(yīng)商處購買,，按照使用說明來制備。</p><p>　　5.3.2.2 細(xì)菌培養(yǎng)用發(fā)酵液</p><p>　　酪蛋白大豆胨發(fā)酵液可作為一種可供選擇的對象。</p><p>

45、　　培養(yǎng)基可從工業(yè)品供應(yīng)商處購買,，按照使用說明來制備。</p><p>　　5.3.2.3 無機鹽瓊脂,，通過由下列組分構(gòu)成的溶液來制備</p><p>　　KH2PO4 0.7g</p><p>　　K2HPO4 0.7g</p><p>　　MgSO4.7H2O 0.7g<

46、;/p><p>　　NH4NO3 1g</p><p>　　NaCl 0.005g</p><p>　　FeSO4.7H2O 0.002g</p><p>　　ZnSO4.7H2O 0.002g</p><p>　　MnSO4.7H2O

47、 0.001g</p><p>　　H2O 1000ml</p><p>　　再把20g瓊脂加到上述溶液中,，在高壓消毒蒸鍋中于120℃±1℃滅菌20分鐘。滅菌之后,，用0.01mol/l無菌NaOH溶液調(diào)節(jié)PH值至7.0。</p><p>　　5.3.2.4 無菌緩沖溶液,，20℃時PH值為7.0。</p>

48、;<p>　　分別制備下列兩種溶液</p><p>　　KH2PO4 9.1g/l (溶液A)</p><p>　　Na2HPO4 11.9g/l (溶液B)</p><p>　　將400ml溶液B混合到600ml溶液A中,，在高壓消毒蒸鍋中于120℃±1℃滅菌20分鐘。滅菌之后,，用0.01m

49、ol/l無菌NaOH溶液在20℃調(diào)節(jié)PH值至7.0。</p><p>　　5.4 土壤填埋實驗</p><p>　　使用一具有一定持水力,，(60±5)%含水量的活性土壤(見附錄A)。</p><p>　　持水量持水力是土壤被水飽和后土壤中的水含量。</p><p>　　液態(tài)土壤提取液的PH值(20g水中有1g土壤)在4.0～7.

50、0之間。</p><p>　　按照附錄A測定土壤的含水量和持水量持水力。假如土壤含水量超過上限,，可在實驗室環(huán)境條件下將其展成一薄層,，不要加熱土壤或讓其干透,，因為這會影響到土壤中的微生物群。假如需要提高土壤含水量,，可以使用水溶液(1L水中含1 gNH4NO3和0.2gK2HPO4)來調(diào)節(jié)。</p><p><b>　　6、實驗試樣</b></p>

51、<p>　　6.1 形狀和尺寸</p><p>　　樣品的形狀和尺寸由下列將做的真菌、細(xì)菌或土壤裸露實驗所決定。</p><p>　　假如需測定樣品厚度的變化,，使用的樣品要取自原始材料,，如果材料在使用之前需要成型,，則使用樣品的最大厚度為0.5mm。</p><p>　　假如需測定樣品質(zhì)量的變化,，使用邊長30mm～60mm,，最大厚度為2mm的正方

52、形樣品,，當(dāng)用目測來評價樣品外觀上的變化時,，樣品的尺寸要求不嚴(yán)格,，只是樣品厚度建議為0.5～2mm。</p><p>　　因為微生物可以影響實驗樣品的表面,，所以只有用相同尺寸樣品進行實驗,，結(jié)果才有可比性。</p><p>　　6.2 樣品組及每組數(shù)量</p><p>　　6.2.1 樣品組</p><p>　　對每個試樣和每種實驗

53、方法,，準(zhǔn)備三組樣品</p><p>　　O組：:對照樣品,，在標(biāo)準(zhǔn)溫度和濕度條件下保存;</p><p>　　I組:：用微生物接種并已培養(yǎng)的樣品;</p><p>　　S組:：滅菌樣品,，在與I組相同的條件下保存。</p><p>　　6.2.2 每組的數(shù)量</p><p>　　目測時,，每組至少制備5個樣品,，即

54、每個試樣和每種實驗方法總計至少15個樣品。</p><p>　　測量質(zhì)量變化時,，每組至少制備6個樣品,， 即每個試樣和每種實驗方法總計至少18個樣品。</p><p>　　其它評定方法,，使用參考標(biāo)準(zhǔn)中所述的樣品數(shù)量。</p><p>　　各種評價實驗分別進行。</p><p>　　但是,，用來測定質(zhì)量或其它物理性質(zhì)變化的試樣也可用于目測（

55、實驗）。</p><p><b>　　7、樣品的制備</b></p><p><b>　　7.1 清洗</b></p><p>　　在方法A和C中,，把樣品浸到乙醇—水混合物(5.1.11.1)中1分鐘并在45℃干燥4小時,，除非乙醇對它們有不利影響,，如果真有影響,，將樣品貯存在無菌的容器中,，用無菌鑷子夾取樣品,，以

56、后的實驗都要用鑷子夾取樣品以避免外部的有機物質(zhì)污染樣品。</p><p>　　對方法B,，B＇或D,，不需清洗樣品。</p><p>　　7.2 標(biāo)注和保存</p><p>　　在環(huán)境溫度下,，將清洗過并已標(biāo)注過的(或加印記)樣品保存在培養(yǎng)皿中(5.1.8)。</p><p>　　實驗中,，對樣品進行標(biāo)注或加印記可能導(dǎo)致塑料的表面發(fā)生反應(yīng),

57、，在這種情況下,，把樣品分別保存在合適的容器中(如培養(yǎng)皿),，并在培養(yǎng)皿上而不是樣品上進行標(biāo)注,，以避免樣品表面發(fā)生反應(yīng),，在其它情況下,，可以使用合適的標(biāo)記直接標(biāo)注樣品。</p><p>　　7.3 調(diào)整和稱量</p><p>　　把用于測定質(zhì)量變化的樣品組在環(huán)境溫度下保存在干燥器(5.1.3)中,，直至每個樣品的質(zhì)量(m1,，m2,，m3,，等等)恒定到接近0.1mg(通常在48小時

58、之后),，記錄每一樣品的質(zhì)量。如無其它要求,，用于目測和(或)用于測量物理性質(zhì)(除質(zhì)量變化外)變化的樣品不需調(diào)整這個階段。</p><p>　　有興趣的成員經(jīng)許可后可將樣品在45℃保存在干燥器(5.1.3)中,，在這種情況下實驗之前應(yīng)在氧化硅膠上將樣品冷卻到室溫,，且保存在20℃±1℃和(65±3)%RH的環(huán)境中直到恒重。如果采用此方法,，應(yīng)在實驗報告中注明。</p><p

59、><b>　　8、過程</b></p><p><b>　　8.1 實驗溫度</b></p><p>　　在23℃±1℃和(50±3)%RH的標(biāo)準(zhǔn)條件下(見ISO291)制備和評價樣品,，并在24℃±1℃或29℃±1℃進行樣品培育。</p><p><b>　　8.

60、2 實驗方法</b></p><p>　　描述實驗方法的總框圖在表3中給出。</p><p>　　測定方法和參數(shù)的選擇取決于實驗材料和材料預(yù)計使用條件。</p><p>　　表3— 實驗方法一覽表</p><p>　　8.2.1 真菌生長試驗(方法A)</p><p>　　8.2.1.1 裝填培養(yǎng)皿

61、</p><p>　　滅菌之后,，把非完全瓊脂培養(yǎng)基(5.2.3.4)注入到滅菌的培養(yǎng)皿中,，深約5mm,，然后冷卻固化。</p><p>　　8.2.1.2 實驗樣品放置</p><p>　　盡可能平展地把樣品分別放在固化了的培養(yǎng)基上,，避免樣品之間或樣品與培養(yǎng)皿壁之間任何接觸。隨意地把制備好的培養(yǎng)皿分成數(shù)量相同的兩組,，一組標(biāo)I,，另一組標(biāo)S。</p&g

62、t;<p>　　假如預(yù)料樣品會從培養(yǎng)基中浮起,，用重物穩(wěn)定住它們。</p><p>　　8.2.1.3 孢子懸浮液的制備</p><p>　　利用無機鹽/潤濕劑溶液(5.2.3.2)，由好的芽孢制備孢子懸浮液。</p><p>　　8.2.1.3.1 孢子采集</p><p>　　每一培養(yǎng)管中(見5.2.2)放入5ml無機鹽

63、/潤濕劑溶液,，用一無菌的接種針慢慢地刮芽孢表面,，以制備液態(tài)的孢子懸浮液。慢慢地振動培養(yǎng)管以分散液體中的孢子,，用相同的培養(yǎng)試管重復(fù)此過程三次,，然后用無菌玻璃球振動每一真菌培養(yǎng)管的孢子懸浮液,，通過一薄層無菌棉或玻璃棉過濾以除去真菌生成物。</p><p>　　8.2.1.3.2 離心洗滌孢子與工作液制備</p><p>　　將過濾后的孢子懸浮液進行無菌離心處理,，去掉上清液,，再使

64、沉淀物在25ml無機鹽溶液(5.2.3.1)中懸浮,，再離心。使洗滌過的沉淀物在50ml標(biāo)準(zhǔn)無機鹽溶液中懸浮,，反復(fù)對孢子懸浮液進行洗滌是為了保證消除可能引起塑料應(yīng)力開裂的所有表面活性物質(zhì)。</p><p>　　調(diào)節(jié)濃度至約106個孢子/ml(使用計數(shù)器或濁度儀來確定)。</p><p>　　對每一實驗真菌都重復(fù)上述操作,，混合含有相同孢子數(shù)量的相同體積的五種懸浮液,，以得到最終的混合孢子

65、懸浮液用來培養(yǎng)。制備后的孢子懸浮液應(yīng)在6小時內(nèi)使用。</p><p>　　注—：當(dāng)試驗新的塑料配方時,，研究人員可使用單一真菌或已選擇好的幾種真菌組成的混合物來進行預(yù)實驗。</p><p>　　8.2.1.4 孢子壽命檢驗</p><p>　　將完全瓊脂培養(yǎng)基(5.2.3.5)注倒入到兩個無菌培養(yǎng)皿中,，按8.2.1.1所示步驟,，從每一種孢子懸浮液(混合之前)取

66、一滴進行接種。在24℃±1℃或29℃±1℃培育3～4天(在與實際相同溫度條件下進行壽命檢驗),，如真菌沒有大量生長,，用其它的培養(yǎng)管來制備新的孢子懸浮液并重復(fù)此實驗。</p><p>　　8.2.1.5 樣品的接種或消毒</p><p>　　對I組中的樣品,，吸取0.1ml在8.2.1.3中制備的孢子懸浮液均勻的噴在每一樣品和瓊脂培養(yǎng)基的表面;對S組中的樣品,，吸取3

67、ml殺菌液(5.1.11)噴在每一樣品和瓊脂培養(yǎng)基的表面。</p><p>　　8.2.1.6 培養(yǎng)</p><p>　　對此方法有興趣的成員可經(jīng)協(xié)商后,進行以下實驗:</p><p>　　在24℃±1℃或29℃±1℃培育已接種的樣品和無菌對照樣品4周，成員團體經(jīng)許可后或更長時間可以延長。采取保護措施防止冷凝水滴在樣品表面。假如實驗周期持續(xù)時間

68、長于4周,，根據(jù)8.2.1.5每4周樣品要用再接種一次,使用在無菌水中洗滌和離心過的孢子懸浮液(見8.2.1.3.2)再接種一次。</p><p>　　假如用目測實驗方法,，在4周的培育期內(nèi),，如果用肉眼即可以看到真菌的生長,，則實驗可以結(jié)束。</p><p>　　假如目測結(jié)果不明顯,，可以延長實驗期。如果將樣品移植到新制備的瓊脂培養(yǎng)基上并每隔4周接種一次,，那麼所得的實驗結(jié)果將比僅僅對樣

69、品進行重復(fù)接種而不進行移植的方法要好。</p><p>　　8.2.2 抑霉菌作用的測確定(方法B)</p><p>　　8.2.2.1 裝填滿培養(yǎng)皿</p><p>　　按照8.2.1.1中給出的方法,，但使用完全瓊脂培養(yǎng)基(5.2.3.5)。</p><p>　　8.2.2.2 實驗樣品的準(zhǔn)備放置</p><p&

70、gt;　　按照8.2.1.2中給出的方法,，除非在清洗樣品和測量開始實驗之間至少有72小時的間隔外,，不要否則不要用乙醇—水混合物清洗樣品。</p><p>　　8.2.2.3 孢子懸浮液的制備</p><p>　　按照8.2.1.3中給出的方法,，但洗滌后的沉淀物在無機鹽/葡萄糖溶液中懸浮。</p><p>　　8.2.2.4 孢子壽命測定</p>

71、<p>　　按照8.2.1.4中給出的方法進行。</p><p>　　8.2.2.5 樣品的接種或消毒</p><p>　　對L組中的樣品,，吸取適量的在8.2.2.3中制備的孢子懸浮液噴在每一樣品和瓊脂表面;對S組中的每一樣品,，吸取適量的殺菌液(5.1.11)噴在表面。</p><p>　　8.2.2.6 培養(yǎng)</p><p

72、>　　按照8.2.1.6中給出的方法進行。</p><p>　　如果經(jīng)許可，我們認(rèn)為培養(yǎng)期應(yīng)可以長于4周,，每四周吸少量的無機鹽/葡萄糖溶液(5.2.3.3)噴在樣品上。</p><p>　　8.2.2.7 方法B’</p><p>　　方法B’與B相比有所變化不同,，即需培養(yǎng)基生長茂盛后再將樣品置于培養(yǎng)基上,，但是用肉眼看不到芽孢生成。,多數(shù)情況下,，此方

73、法對塑料產(chǎn)生的生物影響比方法B更強烈。</p><p>　　對方法B’,，按照8.2.2.1和8.2.2.2中給出的方法進行,，但僅把一半數(shù)量的樣品放在培養(yǎng)皿中,，這構(gòu)成S組;只有瓊脂而無樣品的培養(yǎng)皿標(biāo)記為IL組;把另一半樣品放在空培養(yǎng)皿上(I2組)。因此,，得到如下幾組:</p><p>　　S組——有瓊脂和樣品的培養(yǎng)皿;</p><p>　　L組——只有瓊脂而無

74、樣品的培養(yǎng)皿;</p><p>　　空白培養(yǎng)皿——沒有瓊脂只有樣品的培養(yǎng)皿。</p><p>　　然后按照8.2.2.3,，8.2.2.4和8.2.2.5給出的方法,，對IL組接種,，S組滅菌。</p><p>　　在24℃±1℃或29℃±1℃溫度下培育這三組樣品。</p><p>　　一旦觀察到IL組中的樣品生長出真菌,

75、，則在可看見芽孢形成之前(通常在真菌生長2～3天后),，從空白培養(yǎng)皿中移出樣品,，把它們放在IL組進行培養(yǎng)。</p><p>　　按照8.2.2.6中給出的方法,，將真菌進行再培養(yǎng)。</p><p>　　8.2.3 細(xì)菌實驗過程方法(方法C)</p><p>　　8.2.3.1 清洗樣品</p><p>　　見7.1,， 樣品儲存在無菌容

76、器中保存樣品,，并用無菌鑷子夾取樣品,，在以后也只能用無菌鑷子夾取它們。</p><p>　　8.2.3.2 無機鹽瓊脂培養(yǎng)基的制備</p><p>　　按照5.3.2.3給出的方法制備足量的培養(yǎng)基。</p><p>　　允許冷卻至45℃,，并按8.2.3.5描述的方法進行。</p><p>　　8.2.3.3 細(xì)菌細(xì)胞懸浮液的制備<

77、;/p><p>　　將培養(yǎng)細(xì)菌培養(yǎng)的原物料在5.3.1中制備的瓊脂培養(yǎng)基上進行培養(yǎng),，然后將細(xì)菌接種在肉汁中(5.3.2.2),，并在29℃±1℃的溫度下培育24小時,。使用無菌鉑、鎳鉻合金或塑料圈把24小時培養(yǎng)后的物質(zhì)轉(zhuǎn)到10ml無菌緩沖溶液中(5.3.2.4)。用無菌緩沖溶液稀釋懸浮液得到含有約106個/L的細(xì)胞懸浮液(使用計數(shù)器或濁度計來測定),，得到的細(xì)胞懸浮液應(yīng)在1小時之內(nèi)使用。</p>

78、;<p>　　不要把任何多余的營養(yǎng)物摻到細(xì)胞懸浮液中。</p><p>　　8.2.3.4 壽命檢驗</p><p>　　分別吸三滴8.2.3.3中制備的細(xì)胞懸浮液加到兩個含有10ml無菌細(xì)菌培養(yǎng)基瓊脂的培養(yǎng)皿中,，在29℃±1℃的溫度下培育24小時至48小時,，假如細(xì)菌在兩個培養(yǎng)皿中都沒很好地生長,，用一新的細(xì)胞懸浮液重復(fù)測定。</p><p

79、>　　8.2.3.5 無機鹽瓊脂的接種</p><p>　　用一足量的細(xì)菌懸浮液在從8.2.3.2中制備的熔化融態(tài)的瓊脂上接種,，得到濃度約50000個/升的瓊脂.立即將瓊脂和細(xì)胞懸浮液的混合液倒到盤中。</p><p>　　8.2.3.6 裝填滿培養(yǎng)皿并準(zhǔn)備實驗樣品</p><p>　　8.2.3.6.1 LI組(培育接種樣品)</p>

80、<p>　　把足量的在8.2.3.5中制備的已接種的瓊脂注倒入到無菌培養(yǎng)皿中,，使瓊脂層厚5mm。</p><p>　　瓊脂固化之后,，在每一瓊脂層表面上放一個樣品,，在樣品上澆足量的已接種的瓊脂覆蓋住它,，允許其凝膠化。</p><p>　　覆蓋住樣品的最后的瓊脂層深1mm。</p><p>　　8.2.3.6.2 S組(無菌對照組)</p>

81、;<p>　　把按8.2.3.2描述而制備的未接種的無機鹽瓊脂注入到無菌培養(yǎng)皿中。將6個樣品浸泡到鄰苯基苯酚溶液(5.1.11.2)中殺菌,，然后把它們放到固化的瓊脂上,，將瓊脂用同樣的溶液殺菌。用未接種的瓊脂層覆蓋樣品。</p><p>　　8.2.3.7培育</p><p>　　在29℃±1℃和90%相對濕度下培育兩組樣品(L和S)4周。對此感興趣的成員經(jīng)同意

82、許可之后時間可延長些。</p><p>　　如果實驗僅僅采用目測方法,，那麼如果若在4周的培育期內(nèi)細(xì)菌的生長用肉眼清晰可見,，則實驗可以結(jié)束了認(rèn)為完成。</p><p>　　8.2.4 土壤填埋實驗(方法D)</p><p>　　8.2.4.1 土壤的生物活性</p><p>　　從將漂白過的、未處理的棉織物(250g/m2)裁下樣布條(

83、2.5cm×10cm)埋在土壤中培育7天,，7天后,，布樣條的拉伸強度應(yīng)小于原始強度的25%,，這反映出當(dāng)土壤中溶解的細(xì)胞的活性達到這一水平時，。如此,則總菌叢的活性一般也是足夠的。</p><p>　　注—：建議把一對照棉條同樣品埋在一起,，以檢驗土壤的生物活性。</p><p>　　8.2.4.2 方法步驟</p><p>　　8.2.4.2.1

84、</p><p>　　用實驗土壤注滿足夠多的1L的保鮮瓶中,，該土壤的含水量為持水量持水力的(60±5)%。(見5.4)。</p><p>　　8.2.4.2.2 (見5.4)為了目測，在每一培育期,，使用刮刀和鑷子把樣品埋入至少兩個</p><p>　　瓶中,，填埋方法如圖1所示。檢驗土壤活性(見8.2.4.1)用的對照棉條也埋入每一瓶中。為了保證氧氣

85、流通,，不要蓋緊瓶子,，但可在蓋和瓶之間放一約1mm的金屬環(huán)。</p><p>　　不要壓緊瓶中的土壤,，覆蓋樣品的土壤層的深度不應(yīng)超過12.5cm。用于質(zhì)量損失失重測定的正方形樣品可以垂直埋放,，用于拉伸實驗的樣品則可橫向埋在大一些的瓶中。</p><p>　　8.2.4.2.3 無菌條件下對照控制實驗,，將帶有棉條(見8.2.4.1)的土壤裝入1L保</p><p

86、>　　鮮瓶中,，擰緊瓶蓋(對每一培養(yǎng)期至少要2個瓶),，然后將此土壤在連續(xù)三天個連續(xù)日內(nèi)于120℃在高壓消毒蒸鍋中(壓力2巴)滅菌30分鐘。在每一個瓶中放兩個塑料樣品,，首先需把樣品浸泡到鄰苯基苯酚溶液中(5.1.11.2)殺菌,，然后還需在土壤上注入3ml鄰苯基苯酚溶液。</p><p>　　注意———為了防止滅菌以后冷卻過程中緊緊密封的容器破裂,，要使用帶有壓力保護罩的高壓消毒蒸鍋。當(dāng)使用沒有防護罩的老

87、式壓力鍋時,，在打開高壓消毒蒸鍋之前,，瓶子需冷卻到約65℃。</p><p>　　注—：土壤和樣品也可使用射線滅菌。</p><p>　　圖一 土壤填埋實驗中實驗樣品的放置準(zhǔn)備(剖面圖)</p><p>　　8.2.4.2.4 在29℃±1℃和(97±2)%相對濕度條件下,，在培養(yǎng)箱中培</p><p>　　育制備好

88、的實驗瓶4周或更長時間。</p><p>　　注—瓶子要在(97±2)%RH的濕度下培育,，以防止土壤干燥。</p><p>　　在長期的土壤填埋實驗中,，在實驗開始時定期稱量瓶子通過間斷的稱量瓶子檢驗測定土壤的含水量,，并且在合適當(dāng)?shù)臅r間間隔檢驗它們的質(zhì)量,，假如有必要,，可加1g/l硝酸銨溶液。</p><p>　　試驗周期為四周的土壤填埋實驗僅僅適用

89、于對容易劣化的塑料是足夠的。為了能夠適應(yīng)不同的塑料,，實驗時間可以延長到六個月。為了測定塑料的長期行為,，如建筑物、建筑襯墊材料等等的劣化衰減歷程,，我們需平行進行若干測定,，可在6個月和12個月后取出樣品進行測定。如果有必要,由衰變劣化速率決定,，可在18個和24個月或24和48個月后再取樣品進行測定。</p><p><b>　　9、評價定</b></p><p>

90、;　　9.1目測來評定價樣品上真菌的生長行為(方法A,，B和D)</p><p>　　首先用目測觀察暴露裸露的樣品(I L組和S組),，假如必要,，有時可用體視顯微鏡觀測(放大倍數(shù)為50倍)。按照表4中給出的等級數(shù)評價定真菌的生長程度。方法A中,，也給出了樣品周圍培養(yǎng)基上真菌生長的強度。</p><p>　　注—為了提高評定的準(zhǔn)確度,，建議把一網(wǎng)格放在樣品上以便能評定價表面上真菌生長比表

91、面生長率。</p><p>　　假如在一組中樣品的目測結(jié)果差別大于兩個等級級別,，那麼要用新的樣品重新測定。</p><p>　　用清洗后的樣品(見9.2.1)進行測定可提供進一步的信息。目測時,可以拍攝彩色照片對記錄目測結(jié)果,以幫助做出正確的判斷非常有用。</p><p>　　表4 真菌生長行為的評價定</p><p>　　9.2 用于

92、測確定實驗樣品在質(zhì)量和(或)其它物理性質(zhì)方面變化的評價測量方法。</p><p><b>　　9.2.1 清洗</b></p><p>　　從瓊脂中拿出實驗樣品,，把它們浸泡到乙醇—水混合物中(5.1.11.1)5分鐘后,，在流水下漂洗,，然后用濾紙擦凈,，最后在室溫下隔夜干燥。</p><p>　　在測定的最后,，使用氣體(如環(huán)氧乙烷)或蒸

93、汽(在高壓消毒蒸鍋里)給目測到有細(xì)菌生長的瓶子滅菌。</p><p>　　9.2.2 質(zhì)量變化</p><p>　　為了對測定質(zhì)量變化的測定,，把清潔的樣品放在干燥器中,，定期稱量它們的質(zhì)量,，(精確到0.1mg),，直至恒重(通常在48小時內(nèi))。記錄最終質(zhì)量m1’、m2’………。</p><p>　　注—：建議可按照7.3中描述的方法步驟進行。</p>

94、;<p>　　對于每一個樣品,，測定暴露前后的質(zhì)量有變化差值,，即m’,，如m1=m1’－m1,，這個變化差值通常是負(fù)數(shù),，相當(dāng)于質(zhì)量有損失。</p><p>　　當(dāng)測量質(zhì)量變化時,，接種的樣品和無菌的對照樣品應(yīng)有相同的尺寸。</p><p>　　9.2.3 其它物理性質(zhì)變化的測定</p><p>　　測量暴露樣品和未暴露的對照樣品的性質(zhì)，假如能夠同

95、時對暴露樣品和未暴露的對照樣品的性質(zhì)進行測定如果可能，應(yīng)同時進行。,要根據(jù)各自的原料,，產(chǎn)品或標(biāo)準(zhǔn)實驗方法進行選擇所用方法,，如下:</p><p>　　按9.2.1清洗樣品并且根據(jù)有關(guān)的塑料成型用的原材料標(biāo)準(zhǔn)進行調(diào)節(jié)。</p><p>　　從有關(guān)的塑料成型所用的原材料標(biāo)準(zhǔn)中選擇測定參數(shù),，樣品調(diào)節(jié),，實驗條件和樣品尺寸等。</p><p>　　假如必要,，對此感興

96、趣的成員經(jīng)協(xié)商許可后可改變實驗條件,，在實驗報告中需應(yīng)注明此條件。</p><p><b>　　10、結(jié)果表示</b></p><p>　　利用各種結(jié)果,，計算算術(shù)平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差。</p><p><b>　　10.1 目測</b></p><p>　　每一樣品的目測結(jié)果可采用表4中給出的真菌生

97、長級數(shù)的方式來表達 。</p><p>　　假如樣品在清洗之后進行另外的目測(見9.1),，可用同一方式來表達目測結(jié)果 。</p><p>　　表5列出了對結(jié)果的解釋如表5所示。</p><p><b>　　表5 結(jié)果解釋</b></p><p>　　10.2 質(zhì)量變化</p><p>　　測

98、定每一樣品的質(zhì)量變化m=m’－m，, ,計算并記錄每一組的算術(shù)平均值,，和計算到，精確到小數(shù)點后第一位小數(shù)的，質(zhì)量變化的平均百分率采用下述公式計算</p><p><b>　　…⑴</b></p><p>　　式中:是原始樣品質(zhì)量的平均值。</p><p>　　利用統(tǒng)計分析的方法測定樣品的質(zhì)量變化是否有較大的顯著變化(可靠信度極限99%)<

99、;/p><p>　　公式1僅僅應(yīng)用在于具有相同尺寸的LI組和S組的樣品,，所以在暴露之前質(zhì)量有可比性。</p><p>　　10.3 其它物理性質(zhì)的參數(shù)</p><p>　　計算每組樣品(O,，L I和S組)在每一性質(zhì)上的變化的算術(shù)平均值,，記錄它們分別記為，，和。</p><p>　　對每一性質(zhì)，用公式(2)計算接種樣品相對于滅菌樣品的變化百

100、分率變化</p><p><b>　　…⑵</b></p><p>　　對每一性質(zhì)，用公式(3)計算接種樣品相對于對照樣品的變化百分率變化</p><p><b>　　…⑶</b></p><p>　　第一個值比第二個值能更好地表征生物對塑料的破壞作用。</p><p>&l

101、t;b>　　11、測量準(zhǔn)確度</b></p><p>　　按各自精度標(biāo)準(zhǔn)所有進行各種測定量結(jié)果都有各自的精密度,需用，用統(tǒng)計分析的方法表示測定結(jié)果(均值/標(biāo)準(zhǔn)偏差)。</p><p>　　質(zhì)量,，尺寸或其它物理性質(zhì)變化的結(jié)果的準(zhǔn)確度是由實驗方法的精密度和按照本標(biāo)準(zhǔn)處理的固有的系統(tǒng)誤差來決定的。</p><p>　　目測結(jié)果的準(zhǔn)確度很大程度上依賴于進

102、行觀察測評定的個人,，因此,，此種情況,，我們建議建立照片檔案圖片檔案,，以比較物質(zhì)外觀上的變化。</p><p><b>　　12、實驗報告</b></p><p>　　實驗報告應(yīng)包含下列項目:：</p><p>　　a)參照考的國際標(biāo)準(zhǔn)；</p><p>　　b)能夠完全區(qū)分實驗材料的所有必要材料；</p>

103、;<p><b>　　c)樣品的尺寸；</b></p><p>　　d)培育情況及使所用的培育溫度；</p><p>　　e)所使用的殺菌液(5.1.11)的類型；</p><p>　　f)用的方法(A、B、B’、C或D)和每種情況下進行的測定的數(shù)量；</p><p>　　g)所使用的真菌、細(xì)菌和土壤名稱；

104、</p><p>　　h)真菌、細(xì)菌菌種和土壤的起來源的詳細(xì)情況；</p><p>　　I）測定的物理性質(zhì)；</p><p>　　j)測定物理性質(zhì)使用的方法；</p><p><b>　　k)實驗結(jié)果：</b></p><p>　　1）每一個樣品的真菌生長級數(shù)(見10.1)，</p>

105、<p>　　2）每一個樣品的質(zhì)量的絕對變化(用g表示),，每一組變化的平均值和平均百分率(見10.2)，</p><p>　　3）每組樣品每一個其它測定參數(shù)的性質(zhì)變化的平均值,，無菌樣品每一參數(shù)的變化百分率和對照樣品的變化的百分率相比(見10.3)。</p><p>　　l)任何異常情況,，如被真菌和細(xì)菌而非實驗用有機物污染的情況,，不正常的生長特征,，芽孢生長影響因素,，變色

106、等；</p><p>　　m)與本標(biāo)準(zhǔn)的任何偏差；</p><p>　　n)實驗的實驗室識別的所有必要細(xì)節(jié)；</p><p><b>　　o)測定的日期；</b></p><p>　　p）實驗人和實驗室負(fù)責(zé)人的簽名。</p><p>　　13、參考資料(略)</p><p>

107、;<b>　　附錄A</b></p><p><b>　　（標(biāo)準(zhǔn)）</b></p><p>　　土壤水含水量和持水量持水力的測定方法</p><p><b>　　A1、總則</b></p><p>　　可以用任何具有規(guī)定的溶解細(xì)胞質(zhì)活性（8.2.4.1）的實驗土壤來都可以用來進

108、行這些本測定。這里采用商用的標(biāo)準(zhǔn)土壤和商用的混合土壤作對比實驗,，得到有可比性的結(jié)果。在實驗開始之前,，每一種土壤將在25～30℃,，約60%的持水量持水力條件下預(yù)處理培養(yǎng)2～3個月,。每個測定都在這個水含量下進行以便使微生物活性最佳化。規(guī)定具有100%持水量持水力的土壤的特定含水量是60%,，而持水量持水力為60%和180%的土壤中的有效含水量則分別為36%和108%。</p><p>　　A2、水含水量的測定

109、</p><p>　　在3個培養(yǎng)皿中分別鋪開約50 ml的土壤，將通過烘箱溫度控制在１０４104℃±１℃加熱干燥培養(yǎng)皿中的土壤，將培養(yǎng)箱放入其中４4小時時間加熱干燥，，直至恒重。每隔４小時，將培養(yǎng)皿然后在干燥器中冷卻，并稱重（精確到１1mg），當(dāng)兩次連續(xù)兩次稱量偏差異＜０．１0.1％時，可以認(rèn)為達到恒重。</p><p>　　對上述使所用的土壤，如按上述干燥時間進行干燥，不用檢驗

110、，就可以認(rèn)為達到恒重。</p><p>　　對每一培養(yǎng)皿，以如按例中所示的水分占土壤干基重中的百分率來表示含水含量，每次結(jié)果精確到１1％，計算三次測定結(jié)果的均值。</p><p><b>　　示例</b></p><p>　　空白培養(yǎng)皿　　　　　　　　　 １１．３２５11.325g</p&

111、gt;<p>　　含濕土壤的培養(yǎng)皿　　　　　　　 ２０．４７５ 20.475g</p><p>　　濕土壤 　　　　　　　　　　 ９．１５０9.105g</p><p>　　含干土壤的培養(yǎng)皿　　　　　 １６．６００16.600g&

112、lt;/p><p>　　干土壤　　　 ５．２７５ 5.275g</p><p>　　水含量（在干燥時的失重?fù)p失） ３．８７５ 3.875g</p><p>　　水含量（以占土壤干基計的重百分率計）　 ７３73％</p><p>　　A3、持

113、水量持水力的測定</p><p>　　用土壤把3個50ml玻璃過濾坩堝(過濾能力,2或3達西尺寸大小3，例如2D3)的每一個注滿至坩堝邊緣之下0.5cm,，將木板從離坩堝從1cm高處落到木板向下壓三次坩堝表面三次，,，以壓緊土壤。</p><p>　　然后把每一個過濾坩堝各放在一個玻璃燒杯中,，用水注滿入燒杯直至水平面高于過濾坩堝上緣1cm,，當(dāng)上面土壤因為毛細(xì)管作用出現(xiàn)濕潤時,，加更多地

114、加的水直至覆蓋住土壤表面。</p><p>　　12～16小時之后(隔夜),，從玻璃杯中拿出過濾坩堝,，使用一噴水泵,，吸取沒有留存在土壤中的水,，吸取時間10±1分鐘,，用一塊用玻璃盤稱量過的濕布蓋住坩堝。(濕布已稱重),一起放在一玻璃盤上。</p><p>　　在溫控在104±1℃的烘箱內(nèi)加熱4小時以干燥過濾坩堝中的含飽和水的土壤至恒重。然后每４小時后，在干燥器中冷

115、卻，稱重并稱重（精確到１1mg），當(dāng)兩次連續(xù)兩次稱量差異的偏差＜０．１0.1％時，可以認(rèn)為達到恒重。</p><p>　　以前述使所用的土壤，以前測定的如采用上述確定干燥時間可以使用不用檢驗，就認(rèn)為已經(jīng)達到恒重已經(jīng)達到。</p><p>　　對每一過濾坩堝，以如例中所示，按水分占土壤的干基重的百分率計算持水量持水力，每次結(jié)果精確到１1％，計算三次測定結(jié)果的均值。</p>&l

116、t;p><b>　　示例</b></p><p>　　空過濾坩堝 １１．３２５ 11.325g</p><p>　　含新鮮土的過濾坩堝 ２０．４７５20.475g</p><p>　　新鮮土 ９．

117、１５０ 9.150g</p><p>　　含飽和水的土壤的坩堝 ２４．１０５24.105g</p><p>　　含飽水的土壤 １２．７８０ 12.780g</p><p>　　含干燥土的土壤 １６．６０16.600g<

118、/p><p>　　干燥土 ５．２７５ 5.275g</p><p>　　持水量持水力（以g計） ７．５０５ 7.505g</p><p>　　持水量持水力，（以占土壤干基計重的百分率計）１４２ 142％</p><p>　　結(jié)果結(jié)論：

119、土壤最大的持水量持水力為干基重的１４２142％</p><p><b>　　附錄B</b></p><p><b>　　精度</b></p><p>　　方法A，B和C的精度在1978年版ISO846發(fā)布之前已經(jīng)一系列實驗測定過。方法A，B，C，和D的精度也由IBRG（國際生物劣化研究小組）中的塑料工程會進行了一系列實驗。