紫云英轉(zhuǎn)脂蛋白AsE246互作蛋白AsDJL1的鑒定及共生固氮功能研究.pdf

1、在前期工作中，本研究室構(gòu)建了在紫云英根瘤中增強(qiáng)表達(dá)的cDNA文庫(kù)，從文庫(kù)中篩選獲得若干根瘤特異表達(dá)的紫云英基因。其中編碼轉(zhuǎn)脂質(zhì)蛋白(LTP)的基因AsE246經(jīng)進(jìn)一步研究表明其作用與共生固氮密切相關(guān)。
　　利用酵母雙雜交技術(shù)，我們篩選獲得了與AsE246相互作用的候選靶蛋白基因AsDJL1的部分結(jié)構(gòu)域。AsDJL1是DnaJ-like的同源基因，DnaJ蛋白是分子伴侶Hsp70蛋白的輔助蛋白，具有多種生物學(xué)功能，能夠激活A(yù)TPas

2、e的活性，幫助蛋白折疊和進(jìn)一步加工，增強(qiáng)生物抗性，使細(xì)胞膜免受重金屬傷害等。
　　本課題對(duì)AsDJL1在與LTP基因AsE246的互作鑒定及其在紫云英共生固氮中的功能展開研究。首先利用cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)方法獲得AsDJL1基因盼全長(zhǎng)，通過生物信息方法分析了該基因的功能結(jié)構(gòu)域，通過構(gòu)建系列截短突變體，在酵母雙雜交體系中驗(yàn)證了兩個(gè)目標(biāo)蛋白的相互作用，確定了其互作的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域。采用pull-down實(shí)驗(yàn)技術(shù)，證實(shí)了AsDJ