虎榛子NADP-依賴(lài)型檸檬酸脫氫酶在外生菌根中的表達(dá)分析及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、虎榛子是極度退化生態(tài)環(huán)境造林的先鋒樹(shù)種，它能夠在比較干旱貧瘠的山地上成為優(yōu)勢(shì)灌木之一與菌根真菌共生有重要的關(guān)系。外生菌根的形成不僅能改變植物和真菌基因的表達(dá)，從而產(chǎn)生異常功能蛋白，促進(jìn)彼此之間的新陳代謝作用。本研究采用組培苗菌根合成技術(shù)獲得虎榛子組培菌根化苗，分別從菌根組織、根組織及真菌純培養(yǎng)菌絲中提取NADP-依賴(lài)型異檸檬酸脫氫酶，比較三種來(lái)源酶的特性，并從三種材料中提取總RNA，進(jìn)行半定量PCR，比較菌根合成對(duì)宿主植物根內(nèi)NADP-

2、IDH基因的表達(dá)情況。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴對(duì)接種三株土生空?qǐng)F(tuán)菌（Cenococcum geophilum Fr.Cg）(CgO5、CgSO1、CgSO11)菌株的虎榛子幼苗進(jìn)行各項(xiàng)生長(zhǎng)指標(biāo)及菌根侵染率的測(cè)定，發(fā)現(xiàn)接種CgO5的各生長(zhǎng)指標(biāo)及菌根侵染率都比其他兩個(gè)菌根真菌好。表明CgO5與虎榛子的共生效果比其他兩株強(qiáng)。⑵通過(guò)硫酸銨分級(jí)沉淀及葡聚糖凝膠層析純化后的IDH進(jìn)行SDS-PAGE電泳檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，菌根組織、根組織和真菌純培

3、養(yǎng)菌絲異檸檬酸脫氫酶的單亞基相對(duì)分子質(zhì)量約46kD左右。菌根組織、根組織及真菌純培養(yǎng)菌絲NADP-IDH的比活力分別為121.12U/mg、115.24U/mg和102.29U/mg;動(dòng)力學(xué)分析表明其菌根組織、根組織及真菌純培養(yǎng)菌絲NADP-IDH最適pH分別為8.0、7.5和8.5，略偏堿性;最適溫度分別為40℃、50℃和45℃，三種來(lái)源IDH的活性依賴(lài)于不同的二價(jià)金屬離子的存在，Mn2+、Mg2+存在時(shí)酶活性最強(qiáng)，而Ca2+、Zn2

4、+和Ni2+是IDH的強(qiáng)烈抑制劑。菌根組織、根組織及真菌純培養(yǎng)菌絲NADP-IDH對(duì)NADP+的Km值分別為20.83μM、52.63μM和27.7μM;對(duì)異檸檬酸的Km值分別為3.12μM、26.31μM和50μM。⑶采用CTAB法提取的菌根組織、根組織及真菌純培養(yǎng)菌絲總RNA，A260/A280值在1.8-2.0之間，濃度約0.5ug/μL，表明所提取的總RNA中沒(méi)有DNA干擾，RNA純度較高，總RNA經(jīng)過(guò)1％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)完整