褪黑激素對水牛顆粒細胞的調節(jié)和生長抑素基因疫苗免疫程序及安全性研究.pdf

1、奶水牛和生豬是國家鼓勵和優(yōu)先發(fā)展的兩大產業(yè)。開發(fā)提高水牛繁殖力和豬生長速度的新技術，是促進上述兩大產業(yè)發(fā)展的重要舉措。為了:①探討水牛卵泡發(fā)育的調節(jié)機制，促進水牛繁殖新技術的發(fā)展;②優(yōu)化生長抑素基因免疫程度，分析該疫苗的生物安全性，促進該疫苗的推廣應用本研究利用。因此本研究從褪黑激素對水牛卵泡顆粒細胞體外調節(jié)、生長抑素基因免疫程序優(yōu)化與安全性評定等角度開展研究，主要內容和結果如下:
　　1.褪黑激素對水牛顆粒細胞的調節(jié)及其作用機制

2、研究
　　褪黑激素(MLT)受光信號控制，對生殖系統(tǒng)、特別是卵巢功能具有調節(jié)作用。MLT對水牛卵泡發(fā)育是否有調節(jié)作用，尚不清楚。本實驗從顆粒細胞的褪黑激素受體表達、調節(jié)及外源MLT對水牛顆粒細胞凋亡、增殖與激素分泌等方面進行了研究，主要內容和結果如下:
　　(1)提取水牛顆粒細胞RNA，經反轉錄獲得細胞cNDA，并成功擴增出MT1受體特異性條帶，表明水牛顆粒細胞表達褪黑激素受體。
　　(2)將水牛顆粒細胞用含低（0.1

3、nM）、中（1nM）、高（100nM）劑量MLT的培養(yǎng)液處理24小時，在mRNA水平檢測MT1及相關受體的表達情況，結果發(fā)現(xiàn)，MT1受體表達在各濃度MLT作用下明顯上調，F(xiàn)SH和GnRH受體表達顯著下降，LH受體表達在高劑量組顯著上調，中、低劑量組無顯著變化。
　　(3)用MLT處理水牛顆粒細胞24h后，用流式細胞儀檢測細胞凋亡及增殖情況，發(fā)現(xiàn)與對照組相比，高劑量組的細胞凋亡顯著減少，中、低劑量組組無明顯差異;另外，中、高劑量組細

4、胞增殖明顯高于對照組，低劑量組與對照組無顯著差異。用WesternBlot檢測細胞相關調控因子，發(fā)現(xiàn)中、高劑量組中bcl2表達顯著上調，高劑量組中caspase3、p21和p27表達明顯下降，這與流式檢測結果一致。測定培養(yǎng)液中雌激素和孕激素濃度，發(fā)現(xiàn)高劑量組的孕激素分泌明顯減少，而各組的雌激素分泌量變化不明顯。
　　2.生長抑素基因疫苗免疫程序及安全性研究
　　本研究選擇45日齡杜長大三元雜交豬25頭，分成5組，從免疫原(P

5、cs/2SS)劑量（0.5mg，1.0mg，2.0mg）和免疫方式（電轉化和肌肉注射）以及安全性評價等方面著手，比較了各種劑量、兩種給藥方式的免疫和促生長效果，分析了目的基因整合情況，結果如下:
　　(1)免疫質粒后，實驗組豬均有抗體產生，表明疫苗引發(fā)了機體的免疫應答。在初次免疫和加強免疫第2周，抗體陽性豬比例最高，加強免疫后體內抗體水平的維持時間與初次免疫相比明顯增長。同時，在加強免疫后的第2周生長速度也達到高峰，但各組動物激素