端粒介導(dǎo)的甘藍(lán)型油菜人工小染色體的篩選和鑒定.pdf

1、本文以甘藍(lán)型油菜（Brassica napus，AACC，2n=38）品種Westar為材料，在中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所胡贊民研究組油菜人工小染色體研究的基礎(chǔ)上，利用熒光原位雜交和PCR技術(shù)等方法進(jìn)行人工小染色體的鑒定和篩選，使用自交和雜交的方式獲得了具有一對人工小染色體的純合油菜新材料，并對外源基因是否能夠定點(diǎn)整合到油菜小染色體上進(jìn)行了相關(guān)研究，旨在為油菜進(jìn)一步分子育種及染色體結(jié)構(gòu)與功能的研究提供新的技術(shù)途徑和新材料。主要研究

2、結(jié)果如下:
　　1.通過對具有截斷的染色體的兩個轉(zhuǎn)基因株系pWY86-5-73和pWY86-5-75的自交、雜交繼代培養(yǎng)，擴(kuò)大了轉(zhuǎn)基因植株庫的量，獲得了具有小染色體且能夠穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)基因株系，并在培養(yǎng)過程中進(jìn)行了轉(zhuǎn)基因陽性植株的篩選;
　　2.根據(jù)pWY86-5質(zhì)粒結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，本文中采用噴灑除草劑和PCR鑒定的方法對每代培育的所有pWY86-5轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了篩選，每代均選取陽性植株繼續(xù)培育，通過對每代植株的逐步篩選得到了實(shí)

3、驗(yàn)預(yù)期中的含有一定數(shù)量小染色體的轉(zhuǎn)基因株系;
　　3.使用pWY96作為探針雜交各代PCR陽性pWY86-5轉(zhuǎn)基因植株花蕾的染色體，以觀測其中的小染色體，通過熒光原位雜交鑒定，獲得了能夠穩(wěn)定遺傳的、僅具有一對小染色體的純合轉(zhuǎn)基因植株;
　　4.利用從白菜型油菜（Brassica rapa）的BAC文庫中選出的BAC克隆L17制作探針，將該探針與端粒重復(fù)序列探針45S及著絲粒重復(fù)序列探針5S同時與發(fā)生了染色體截斷事件的pWY8