利迪鏈霉菌G117產(chǎn)納他霉素發(fā)酵工藝研究.pdf

1、納他霉素是一種廣譜、高效的天然真菌抗生素，廣泛應用于植物病害生物防治、食品防腐、醫(yī)療等方面。由于目前納他霉素發(fā)酵生產(chǎn)產(chǎn)量低、周期長，其應用受到了限制。利迪鏈霉菌（Streptomyces lydicus）G117是以利迪鏈霉菌A01和A02為出發(fā)菌株，利用基因重排技術選育出來的納他霉素高產(chǎn)新菌株，其發(fā)酵周期較出發(fā)菌株明顯縮短，產(chǎn)量顯著提高。本文對利迪鏈霉菌G117生產(chǎn)納他霉素的發(fā)酵工藝進行了系統(tǒng)的研究。通過對培養(yǎng)基組成和發(fā)酵條件的優(yōu)化，

2、大幅提高了納他霉素產(chǎn)量，并建立了補料分批發(fā)酵動力學模型，為進一步研究及工業(yè)生產(chǎn)提供理論依據(jù)。主要研究結果如下:
　　(1)依次使用Plackett-Burman設計、最陡爬坡法和Box-Behnken中心組合設計優(yōu)化利迪鏈霉菌G117產(chǎn)納他霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基，納他霉素產(chǎn)量較基礎發(fā)酵培養(yǎng)基有顯著提高，由2040.45mg/L提高到了2718.57mg/L，提高了33.2％，且與模型預測的產(chǎn)量2708.06mg/L無顯著性差異。優(yōu)化后的

3、發(fā)酵培養(yǎng)基組成:玉米淀粉46.15g/L、豆粕粉14.80g/L、氯化鈉5.88g/L、葡萄糖10g/L、蛋白胨6g/L、硫酸銨7.5g/L、硫酸鎂0.5g/L、磷酸二氫鉀0.3g/L、碳酸鈣10g/L、高溫淀粉酶0.05g/L。
　　(2)通過試驗確定接種最適種齡24h，最適接種量為9％。發(fā)酵過程中的溫度對納他霉素的產(chǎn)量有顯著影響，較高的發(fā)酵溫度有利于菌體生長，較低的發(fā)酵溫度有利納他霉素的合成，因此對利迪鏈霉菌G117發(fā)酵進行溫

4、度兩階段控制策略，即0-36h，發(fā)酵溫度為30℃，36h后發(fā)酵溫度調(diào)為28℃，采用這一最優(yōu)化的溫度兩階段控制，納他霉素的產(chǎn)量提高到3516.65mg/L，分別較28℃和30℃單一溫度發(fā)酵納他霉素產(chǎn)量提高19.1％和20.34％。
　　(3)確定利迪鏈霉菌G117發(fā)酵的最適初始pH為7.3;采用pH-補糖聯(lián)動的方法，確定了在發(fā)酵過程中控制pH在6.3時納他霉素的產(chǎn)量最高，為5208.88mg/L，明顯高于不控制pH時納他霉素的產(chǎn)量，

5、提高47.49％。發(fā)酵培養(yǎng)24h時添加0.1％丙酸鈉，納他霉素的產(chǎn)量為3982.53mg/L，較不添加前體時的產(chǎn)量提高了10.26％。
　　(4)采用優(yōu)化的培養(yǎng)基在最適的培養(yǎng)條件下進行補料分批發(fā)酵試驗，納他霉素的產(chǎn)量為11.81g/L，較優(yōu)化前提高了69.57％。建立了納他霉素分批補料動力學模型:
　　菌體生長動力學模型:X(t)=1.374e0.1908t/0.897+0.103e0.1908t，R2=0.9978;

6、>　　產(chǎn)物生成動力學模型:P(t)=0.686182ln(0.897+0.103e0.1908t)，R2=0.9600;
　　底物消耗動力學:S(t)=50.7052-1.5952e0.1908t/0.897+0.103e0.1908t-0.8998ln(0.897+0.103e01908t),R2=0.9819。該模型的預測值與試驗值的擬合非常好，能較好的描述利迪鏈霉菌G117補料分批發(fā)酵過程中菌體濃度、納他霉素產(chǎn)量、總糖濃度的