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1、該研究用DDRT-PCR方法,以楊光圣等(1990)育成的在低溫條件下表現(xiàn)雄性可育,而在高溫處理條件下表現(xiàn)雄性不育的甘藍型油菜生態(tài)型細胞質(zhì)雄性不育兩用系8-8112AB為材料,分析、鑒定與育性相關(guān)的mRNA差異表達指紋圖譜.主要結(jié)果如下:1.將DDRT-PCR差異顯示技術(shù)和銀染技術(shù)相結(jié)合運用油菜育性機理研究,建立了一套DDRT-PCR的技術(shù)體系.2.采用3種錨定引物(AAGCT<,12>A,AAGCT<,12>C,AAGCT<,12>G
2、)和26種差異顯示專用引物組成78種引物對,對兩種溫度下的處于胞原發(fā)育期的花蕾(1-2mm)mRNA的DDRT-PCR分析表明,不同引物對擴增出的帶紋數(shù)目不同,最多可達70多條,有些則無,平均每對引物可擴增出約20條清楚的帶紋.3.回收差異表達的cDNA,重擴增后在1.5﹪瓊脂糖凝膠上電泳并檢測純度,該實驗共找到了13個大小在100-250bp的差異表達cDNA片段,其中4個在高溫時特異表達,另外9個在低溫時特異表達.4.將獲得的13條
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