板藍(lán)根多糖對(duì)肺氣虛證小鼠抗H3N2型豬流感病毒試驗(yàn)研究.pdf

1、肺氣虛證導(dǎo)致肺氣虧損，體內(nèi)宗氣合成不足，宣發(fā)無(wú)力，進(jìn)而表現(xiàn)出免疫功能低下的狀態(tài)。板藍(lán)根是傳統(tǒng)清熱藥，主入肺經(jīng)，具有清熱解毒、涼血利咽功效。多糖作為板藍(lán)根的主要活性成分，其良好的抗病毒和免疫調(diào)節(jié)能力受到眾多研究者的青睞。豬流感病毒是引起豬呼吸道傳染病的重要病原，H3N2型豬流感病毒在豬場(chǎng)廣泛存在，可破壞豬的免疫系統(tǒng)進(jìn)而引起免疫抑制，在規(guī)模化豬場(chǎng)難以根除。目前，豬流感無(wú)特效藥，中藥因其資源豐富、毒副作用小、價(jià)格低廉等特點(diǎn)有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。本試

2、驗(yàn)通過(guò)利用MDCK細(xì)胞模型和中醫(yī)癥候動(dòng)物模型分別評(píng)價(jià)和觀察了板藍(lán)根多糖體外和體內(nèi)抗H3N2型豬流感病毒的作用，豐富了中藥抗流感病毒藥庫(kù)，篩選以中醫(yī)證候模型為基礎(chǔ)的抗病毒新藥，也為中醫(yī)證候?qū)W研究、中西醫(yī)結(jié)合防治動(dòng)物疫病提供更多理論依據(jù)?，F(xiàn)將本文主要研究?jī)?nèi)容及研究成果歸納如下:
　　一、采用水煮醇沉法提取板藍(lán)根多糖，利用MDCK細(xì)胞體外培養(yǎng)系統(tǒng)，通過(guò)MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性評(píng)價(jià)板藍(lán)根多糖體外抑制A/Swine/Henan/2010(H3N

3、2)豬流感病毒對(duì)細(xì)胞的感染作用。結(jié)果表明，板藍(lán)根多糖對(duì)MDCK細(xì)胞表現(xiàn)出一定的毒性作用，半數(shù)毒性濃度(TC50)為7.273mg/mL，最大安全濃度(TC0)為2.504mg/mL，板藍(lán)根多糖對(duì)豬流感病毒的阻斷、抑制和直接殺滅作用治療指數(shù)分別是10.158、19.291、0.038。板藍(lán)根多糖在MDCK細(xì)胞上對(duì)豬流感病毒的抑制作用和阻斷作用效果較好，在此藥物安全濃度范圍內(nèi)，板藍(lán)根多糖直接殺滅作用不明顯。
　　二、采用A/Swine

4、/Henan/2010(H3N2)豬流感病毒經(jīng)鼻腔感染6-8周肺氣虛證BALB/c小鼠，通過(guò)觀察和分析感染后小鼠的體重，臟器指數(shù)，病理學(xué)變化以及免疫學(xué)等相關(guān)指標(biāo)，探討H3N2型豬流感病毒感染肺氣虛證BALB/c小鼠動(dòng)物模型致病性變化。結(jié)果顯示，感染豬流感病毒肺氣虛證小鼠精神狀態(tài)表現(xiàn)較差，體重下降幅度大，肺臟出現(xiàn)水腫、出血和炎性細(xì)胞大量增生、細(xì)支氣管黏膜上皮嚴(yán)重脫落、血管周圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等病變，機(jī)體淋巴增值能力、NO、IgG水平降低，促炎

5、因子和抗炎因子水平紊亂且通過(guò)抑制IFN-γ與TNF-α水平影響其間接抗病毒能力。此外，從體重、肺部病理變化和機(jī)體損傷程度等方面綜合分析，肺氣虛證小鼠加重了其感染豬流感病毒引起的病變和損傷。
　　三、以豬流感病毒A/Swine/Henan/2010(H3N2)感染肺氣虛證BALB/c小鼠為模型，經(jīng)板藍(lán)根多糖作用后分別在第2，5，9天觀察和檢測(cè)其體征狀態(tài)、體重增長(zhǎng)率、臟器指數(shù)、肺臟病理變化、腹腔巨噬細(xì)胞活性、淋巴細(xì)胞增殖能力、NO和I

6、gG水平變化、細(xì)胞因子等免疫學(xué)水平。結(jié)果顯示，經(jīng)板藍(lán)根多糖干預(yù)后可明顯改善感染小鼠體征狀態(tài)，提高體重增長(zhǎng)率并提前恢復(fù)至感染前水平，減輕或減小了肺臟水腫、出血、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、肺泡間質(zhì)增生和病變區(qū)域。板藍(lán)根多糖可能通過(guò)促進(jìn)小鼠促炎細(xì)胞因子如IL-1β、IL-6和TNF-α水平，調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，增強(qiáng)機(jī)體炎性修復(fù)能力;通過(guò)促進(jìn)IL-12和IFN-γ的分泌，增強(qiáng)機(jī)體抗病毒作用，減輕肺臟炎性反應(yīng)下調(diào)IL-10的表達(dá)。此外，不同劑量板藍(lán)根多糖在機(jī)體抵抗