利用分子生物學(xué)與細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測(cè)小型昆蟲的共生微生物沃爾巴克氏體（Wolbachia）.pdf

1、沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文利用分子生物學(xué)與細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測(cè)小型昆蟲的共生微生物沃爾巴克氏體（Wolbachia）姓名：張照琳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治指導(dǎo)教師：叢斌2003.6.1沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)硬士學(xué)位論文攘要沃爾巴克氏體(Wolbachia)是廣泛分布于節(jié)肢動(dòng)物體內(nèi)的～類共生菌，通過生殖細(xì)胞盼細(xì)胞質(zhì)傳播，參與多種調(diào)控其宿主生糠活動(dòng)的稅鑭，W隧誘導(dǎo)宿主發(fā)生生殖不親和、產(chǎn)雌弧雌生娥、雌性化等現(xiàn)象。研究沃爾巴克氏體對(duì)于了解昆蟲瓣生

2、殖生物學(xué)、住剮決定稅制、物種遴純及天工調(diào)控昆蟲生殖行為方面意義麓大。試驗(yàn)驀在建立沃爾澄克氏侮(Wolbachia)懿PCR技術(shù)襝溺體系，利用這一體系檢測(cè)沃爾巴克氏體在不同分類階元的小型昆墩中的分布；利用細(xì)胞學(xué)技術(shù)麓察沃爾巴克氐俸的努酃形態(tài)。附試驗(yàn)綴采進(jìn)行分拆，德弱戳下結(jié)論：1利用三種昆蟲總DNA攝取的方演一sDs法、單個(gè)昆蟲總DNA提取法、CTAB法分裂褥蘩供試琵蟲卷娥券眼蜂(Trichogrammacacoeciae)、食憝赤眼蜂(T

3、embryophagum)、玉米蠛赤眼蜂(Tostriniae)、稻水象甲(LissorhoptrusoryzophilusKusche玟瀣室自羧氳(Trialeurodesvaporariorum(Westwood))、桃蚜(Myzuspersicae(Sulzer))和煙蚜黻蜂(AphidiusgifuensisAshmead)的總￡雕A。2三種昆蟲總DNA提取方法的OD比值和DNA濃度(p∥p1)的結(jié)果如下，SDS法：138、06

4、6，l，57、14，l。43、06，154、l。2，l。38、0。54，l。56、150；單個(gè)昆煦總DNA提取法：195、129，l，79、O75，150、O54，152、0。96，18e、O27，194、105；CTAB法：16、et3；l。9、l。77，l。57、O99，166、228，171、144。雖然三種方法的結(jié)果與研磨稷度、昆搬種類、蟲體大，l、稆個(gè)數(shù)套一定關(guān)系，但綜會(huì)寒說，CTAB法在試驗(yàn)成本、聯(lián)提取惑DNA的濃度和質(zhì)量、

5、PCR反應(yīng)的效果和重復(fù)性三方砸優(yōu)于其他兩種方法，怒一種適臺(tái)提毅小型瞧蟲惑DNA的遙熙方法。3建立并驗(yàn)證了沃爾巴克氏體的PCR技術(shù)檢測(cè)體系。PCR反應(yīng)體系的終髂積為209l，含騫tUTaqDNA聚合酶期50～200ng模扳DNA。反應(yīng)程序：94。C3min94℃lmin，55℃lmin，72℃1rain，循環(huán)30次_72℃7min。4利用沃爾豈克氏體wsp基因的一對(duì)通用弓|物(81F，691R)，以7葶孛供試?yán)ハx的總DNA為模板進(jìn)行PCR