3133.炭樣小單孢菌jxnu1產(chǎn)抗生素jx對嗜根考克氏菌的拮抗作用機(jī)理研究

1、碩士研究生學(xué)位論文炭樣小單孢菌JXNU1產(chǎn)抗生素JX對嗜根考克氏菌的拮抗作用機(jī)理研究ThestudyonantagonismmechanismoftheantibioticsJXfromMicromonospacarbonaceaJXNU1againstKocuriarhizophila陳鵬陳鵬院所：生命科學(xué)學(xué)院導(dǎo)師姓名：謝建坤學(xué)科專業(yè)：微生物學(xué)研究方向：微生物的生理與代謝二○一六年六月分類號：號：071072密級：級：無學(xué)校代碼：學(xué)校

2、代碼：10414學(xué)號：號：2013010789I摘要炭樣小單孢菌JXNU1是一株具有廣譜抗菌活性的稀有放線菌，前期已系統(tǒng)地研究了該菌發(fā)酵產(chǎn)抗生素的工藝過程，建立了分離純化抗生素的方法，并獲得了層析純的單組分、粉末狀抗生素產(chǎn)品，經(jīng)初步分析確定其為一核苷類抗生素。在此基礎(chǔ)上，本文對其抗菌機(jī)理進(jìn)行了系統(tǒng)探究。主要研究結(jié)果如下：（1）研究了炭樣小單孢菌JXNU1產(chǎn)抗生素JX對嗜根考克氏菌的體外抗菌活性，結(jié)果表明，抗生素JX對嗜根考克氏菌的最低抑

3、菌濃度為3.64ugmL。12h后，抗生素JX對嗜根考克氏菌的殺菌率達(dá)到99.6%。顯微鏡觀察表明，抗生素處理后的菌體的形態(tài)變大。（2）DAPI染色結(jié)果顯示，DAPI可以和嗜根考克氏菌內(nèi)的DNA和RNA結(jié)合，經(jīng)過抗生素JX作用12h后，菌體內(nèi)的DNA和RNA含量呈無明顯變化，表明抗生素JX對菌體核酸的合成無明顯影響。（3）分析了嗜根考克氏菌分別在0、12MIC、45MIC和MIC的抗生素JX作用下的細(xì)胞壁含量變化，發(fā)現(xiàn)在一定的抗生素濃度

4、范圍內(nèi)，嗜根考克氏菌細(xì)胞壁的含量隨抗生素作用濃度增加而呈現(xiàn)上升趨勢，當(dāng)抗生素濃度達(dá)到MIC時，嗜根考克氏菌細(xì)胞壁含量比對照組細(xì)胞壁增加了76.5%。由此可知，抗生素JX顯著促進(jìn)了嗜根考克氏菌細(xì)胞壁的合成。（4）研究分析了嗜根考克氏菌在終濃度為0、12MIC、45MIC和MIC的抗生素JX作用下的蛋白質(zhì)含量變化，發(fā)現(xiàn)在一定濃度范圍內(nèi)，嗜根考克氏菌蛋白質(zhì)的含量隨抗生素JX的含量增加而呈現(xiàn)下降趨勢。嗜根考克氏菌在不含抗生素的NB肉湯中培養(yǎng)時的

5、蛋白質(zhì)含量為38mgg，而在MIC的抗生素條件下培養(yǎng)的細(xì)胞蛋白質(zhì)含量為18mgg。由此可知，抗生素JX顯著抑制了嗜根考克氏菌蛋白質(zhì)的合成。（5）采用iTRAQ技術(shù)對12MIC抗生素處理組和對照組的嗜根考克氏菌蛋白質(zhì)組進(jìn)行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)了1780個蛋白中有149個差異表達(dá)蛋白，包括表達(dá)上調(diào)蛋白106個（上調(diào)倍數(shù)≥1.20，P≤0.05），表達(dá)下調(diào)蛋白43個（下調(diào)倍數(shù)≤0.833，P≤0.05）。在抗生素的脅迫下，肽聚糖合成相關(guān)酶MurG表