28598.atg5小鼠胚胎成纖維細胞耐受活性氧誘導的非自噬依賴的細胞凋亡及其機制研究

1、浙江大學醫(yī)學院碩士學位論文Atg5小鼠胚胎成纖維細胞耐受活性氧誘導的非自噬依賴的細胞凋亡及其機制研究姓名：孫向玨申請學位級別：碩士專業(yè)：衛(wèi)生毒理學指導教師：朱心強沈漢明20100201浙江人學碩I：學位論文中文摘要活性氧族(reactiveoxygenspecies，ROS)是一組高反應活性的分子，包括單態(tài)氧、氫氧自由基、超氧陰離子、一氧化氮和過氧化氫。研究表明，ROS在細胞凋亡過程中，發(fā)揮著關鍵性的作用。由細胞內線粒體或其他途徑產生的

2、ROS，可以氧化一系列細胞內成分，包括脂類、蛋白質和DNA，進而損傷細胞的結構和功能。對于細胞自噬與細胞凋亡兩種重要的生命活動間相互作用的機制不明，是目前自噬研究的一個瓶頸；而Atg基因在這其中發(fā)揮了何種作用，也是一個亟待解決的問題，只有進一步明確各關鍵Atg基因在其他生命活動過程中所扮演的角色，才有可能更好的分析自噬與其他生命活動的聯系，更好地把握自噬，利用自噬。鑒于自噬和細胞凋亡在生命過程中的重要作用，而對于兩者之間相互作用的研究不

3、甚明確，為了探索自噬和細胞凋亡之間的相互調節(jié)，本實驗擬選用At954小鼠胚胎成纖維細胞(At95／MEFs細胞)作為特異性自噬缺失細胞，和野生型小鼠胚胎成纖維細胞(WTMEFs細胞)一起作為研究對象，觀察兩種MEFs細胞對由硝普鈉(sodiumnitroprusside，SNP)和過氧化氫(hydrogendioxide，H202)兩種ROS引起的細胞凋亡的反應情況，并通過雷帕霉素(rapamycin，Rapa)或氯喹(chloroqu

4、ine，CDP)的預處理和抑制相關自噬基因的表達來調節(jié)wTMEFs的自噬水平，探究自噬和細胞凋亡之間的關系及其潛在機制?！痉椒ā?、細胞培養(yǎng)和藥物處理：wT和At95／MEFs細胞培養(yǎng)在含10％小牛血清和1％青霉素一鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液中，置于含5％C02，37(2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。藥物處理時，分別給予SNP(10mM)和H202(025mM)，各作用3，6，9，12h。2、細胞死亡／凋亡的測定1)流式細胞術PI活細胞染色：藥物處理后