皖北黃牛種群隨機擴增多態(tài)性DNA研究.pdf

1、選取10條隨機引物對皖北黃牛進行隨機擴增多態(tài)DNA(RAPD)分析,并根據(jù)帶紋相似率作了親緣關系聚類.實驗共采集31頭皖北黃牛的耳組織樣,采用高鹽與氯仿結合的快速抽提法提取基因組DNA,結果從0.02~0.05g的組織樣中提取量多數(shù)達到150~300μg.建立了RAPD-PCR的反應體系,10條RAPD引物篩選到4條隨機引物可以得到穩(wěn)定的擴增產物,其中僅有1條引物的擴增產物表現(xiàn)為單態(tài),3條引物的擴增產物具有多態(tài)性.利用能夠產生多態(tài)性的引

2、物對樣本群體進行RAPD和類平均聚類分析,共得到清晰的帶紋382條、擴增片段有19種,平均每個引物每一個體擴增帶紋4.04條,所獲得的標記數(shù)為4~7個,標記分子大小范圍為0.25~2.00kb,各條帶出現(xiàn)的比例為0.1613~1.000;其中,引物S431、S425和S40分別得到9、6和4種擴增帶紋以及5、4和3種多態(tài)標記帶,共有200條為多態(tài)帶紋,多態(tài)性擴增片段的百分比為52.36％.據(jù)此計算了3個多態(tài)性引物對于每兩個個體之間的帶紋

3、相似率、平均帶紋相似率(0.69、0.67和0.87,總平均0.75)、帶紋的平均等位基因頻率(0.47、0.50和0.74,總平均0.57)、平均帶紋雜合度(0.68、0.63和0.36,總平均為0.55)及遺傳多樣性指數(shù)(0.9875、0.6427和0.1925);根據(jù)31個個體間的平均帶紋相似率而作的聚類分析顯示,兩兩個體間的遺傳距離范圍為1.97~14.5.結果表明:1.在秦川牛、云南和貴州的黃牛品種中10條多態(tài)性隨機引物已被文

4、獻證明是可靠的,在皖北黃牛的RAPD-PCR中卻只有4條引物能夠完全擴增出產物,其中引物S1043擴增產物屬于單態(tài),說明皖北黃牛與這三個品種之間存在較大的遺傳差異.2.從BSR、q、H和Shannon遺傳多樣性指數(shù)上來看,在3條多態(tài)性引物中S431反映的遺傳變異信息最大,產物的帶紋最多,多態(tài)性較好;S40反映的遺傳變異信息最小.BSR、q、H及H<,0>的平均值分別為0.75、0.57、0.55和0.61,說明RAPD產物在整體上反映樣