20602.as1dhrs4在食管癌的表達及其對dhrs4基因表達的調(diào)控作用

1、碩士學(xué)位論文題目AS1DHRS4AS1DHRS4在食管癌在食管癌的表達的表達及其對及其對DHRS4DHRS4基因表達的基因表達的調(diào)控作用調(diào)控作用英文英文題目題目AS1DHRS4AS1DHRS4expressionprofileexpressionprofileroleinroleinDHRS4DHRS4genegeneregulationregulationinesophagealcancerinesophagealcancer學(xué)姓名劉

2、婷學(xué)號10920005所在學(xué)院醫(yī)學(xué)院導(dǎo)師姓名黃東陽專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)入學(xué)日期2009年9月答辯日期2012年5月汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文I中文摘要中文摘要自然存在的反義轉(zhuǎn)錄本(naturalantisensetransNATs)是哺乳動物基因組普遍存在的反義轉(zhuǎn)錄本，大部分屬于非編碼RNA在生物體內(nèi)發(fā)揮著重要的生物學(xué)作用，包括基因表達、細胞周期調(diào)控，細胞分化等。有些反義轉(zhuǎn)錄本還與腫瘤的發(fā)生有關(guān)。全反式維甲酸(alltransret

3、inoicacid，atRA，也稱全反式視黃酸)是維生素A在生物體內(nèi)經(jīng)兩步氧化脫氫(Retinol?Retinal→aRA)后產(chǎn)生的小分子脂溶性生理活性物質(zhì)。atRA除在胚胎發(fā)育中是器官、系統(tǒng)正常結(jié)構(gòu)形成的內(nèi)源性形態(tài)原外，對促進生物的正常分化、免疫調(diào)節(jié)，以及抑制（腫瘤）細胞生長、增殖，誘導(dǎo)（腫瘤）細胞分化等方面具有廣泛的生物學(xué)作用。輔酶Ⅱ依賴性視黃醛脫氫還原酶（NRDR）由DHRS4基因編碼，是全反式維甲酸合成代謝的關(guān)鍵酶。人DHRS4

4、與兩個同源基因DHRS4L2，DHRS4L1組成DHRS4基因簇串聯(lián)排列于人類染色體14q11.2位點。Genbank生物信息學(xué)數(shù)據(jù)顯示DHRS45’末端存在反義鏈基因C14f167并與DHRS4形成頭對頭重疊結(jié)構(gòu)，課題組克隆了肝臟正常細胞株HL7702和肝癌細胞株HepG2C14f167轉(zhuǎn)錄的變異體，1865bp的AS1DHRS4，其第二外顯子以頭對頭的形式與正義DHRS4的第一外顯子重疊。以這兩株細胞為模型，發(fā)現(xiàn)AS1DHRS4通過

5、改變?nèi)旧|(zhì)表觀遺傳學(xué)修飾等機制對正義鏈DHRS4基因簇的表達起調(diào)控作用。DHRS4和AS1DHRS4的表達具有組織特異性DHRS4基因在乳腺癌組織中表達異常。然而食管癌當(dāng)中DHRS4，AS1DHRS4表達情況會如何呢？AS1DHRS4對DHRS4基因表達有何影響呢？這些問題目前尚不清楚。為了探討食管癌當(dāng)中AS1DHRS4的表達情況以及其對DHRS4基因表達的調(diào)控作用，我們做了以下工作：（1）采用cDNA末端快速擴增的方法確定了EC109

6、細胞DHRS4基因的反義轉(zhuǎn)錄本，該反義轉(zhuǎn)錄本與AS1DHRS4具有同樣的序列；（2）設(shè)計AS1DHRS4siRNA干擾序列，并將干擾序列轉(zhuǎn)染入EC109細胞，DHRS4基因表達上調(diào)；（3）構(gòu)建AS1DHRS4pcDNA3.0過表達載體，并將其轉(zhuǎn)染入EC109細胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)DHRS4基因表達無明顯變化；(4)采用定量RTPCR方法檢測食管癌各細胞株及食管癌組織DHRS4AS1DHRS4轉(zhuǎn)錄水平結(jié)果顯示AS1DHRS4轉(zhuǎn)錄水平比DHRS4要