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1、||『I_川川lIlfIl__|__Jllf㈣|lJf_fl_||學(xué)睜14041830521分類母Q955河南;彳秘大誓碩士學(xué)位論文日本沼蝦表皮蛋白基因的克隆及分析學(xué)科、專業(yè)研究方向申請學(xué)位類別申請人指導(dǎo)教師生物學(xué)、生理學(xué)甲殼動物生長發(fā)育的體液調(diào)控理學(xué)碩士張宇寧黔冀教授二O一七年五月摘要甲殼動物有著堅硬的表皮,也被稱為外骨骼,作用是維持其物種特異性形態(tài),保護并使之與外部環(huán)境隔離。甲殼動物通過周期性脫去舊的表皮產(chǎn)生新表皮來進行生長發(fā)育。表
2、皮主要由幾丁質(zhì)、蛋白質(zhì)與碳酸鈣構(gòu)成,表皮蛋白(cuticleproteins,CPs)與幾丁質(zhì)結(jié)合形成纖維骨架控制表皮的鈣化,對新表皮的形成起到極其重要的作用。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn),咪唑類物質(zhì)KK42能顯著縮短日本沼蝦(A如c加6m如f甜聊胛堙矽D,zP船e)幼蝦的蛻皮周期,推測CPs可能是其作用的靶分子。CPs作為主要的結(jié)構(gòu)性蛋白,理論上,其表達水平及其表達的時序性改變會影響表皮的厚度,進而影響蛻皮周期的進程。本實驗以實驗室前期轉(zhuǎn)錄組
3、測序為基礎(chǔ),通過NCBIConservedDomainsearch篩選含chitinbind4結(jié)構(gòu)域的目標(biāo)基因,采用qImPCR技術(shù)定量研究相關(guān)基因的時空表達及KK42處理后基因表達的變化,分析它們與蛻皮周期之間的聯(lián)系,為闡明KK一42縮短日本沼蝦蛻皮周期的機制積累資料。將500尾體長30土05cm的日本沼蝦分為實驗組和對照組,實驗組用19510。4m01/L的KK一42溶液浸泡1min,對照組用不含KK42溶液處理。于處理后O、3、6
4、、12、24和48h,取處于C、Do2、D34和A期的尾扇、腹肢和步足表皮提取mRNA,用于后續(xù)研究。結(jié)果如下:根據(jù)實驗室發(fā)現(xiàn)CPs基因的先后順序,將篩選出的3個基因分別命名為脅C尸6、脅CP一7和脅Cp8,己在NCBIGENEBANK數(shù)據(jù)庫注冊,注冊號分別為KY399478、KY3399479和KY411918。通過測序發(fā)現(xiàn)長度分別為373bp、759bp和1183bp。經(jīng)NCBIB1astx比對,慨CP一6與端足蟲(五粥彪如口z把c
5、以,XP0180101631)相似性為70%,使用CutProtFam—Pred推測為編碼RR2家族蛋白;脅CP一7與端足蟲(局尥彪砌臼z把c口,XP0180101571)相似性為73%,推測同屬于RR2家族。脅CP一8與豌豆長管蚜(以cyr歷Ds勿矗。玎p括甜聊,XP0019508062)相似性為43%。上述3個脅C風(fēng)的轉(zhuǎn)錄水平在蛻皮周期的不同階段以及不同的表皮組織呈現(xiàn)明顯的差異。以尾扇中表達量為參照,在C期、Do一2期以及D34期,
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