15934.銅綠假單胞菌甲醛脫氫酶的分子伴侶共表達、純化及酶活檢測

1、指導小組成員名單盧大儒教授朱化星博士陳帥博士摘要甲醛脫氫酶(FDH)作為含鋅中等鏈醇脫氫酶(ADH)的家庭成員之一廣泛存在于原核和真核生物中。該酶能利用NAD作為輔酶，將有毒的甲醛氧化。目前發(fā)現(xiàn)除了惡臭假單胞菌甲醛脫氫酶外，其余的甲醛脫氫酶均需要谷胱甘肽參與甲醛的氧化過程。為了能對其他物種谷胱甘肽非依賴性甲醛脫氫酶進行結(jié)構(gòu)和功能研究，需要建立大腸桿菌表達體系實現(xiàn)具有生物酶活性的甲醛脫氫酶的可溶性表達和高度純化。銅綠假單胞菌(即綠膿桿菌，

2、Pseudomonasaeruginosa)是一種革蘭氏陰性致病菌，可引起人體感染。該菌的FDH與惡臭假單胞菌(Pseudomonasputida)FDH具有高度序列相似性。本研究通過分子克隆技術(shù)構(gòu)建銅綠假單胞菌甲醛脫氫酶基因表達載體，利用共表達技術(shù)，通過分子伴侶‰ES、GroEL和Tig與甲醛脫氫酶在大腸桿菌中共表達，減少了重組蛋白包涵體的形成，顯著提高了可溶性銅綠假單胞菌FDH在大腸桿菌中的表達水平。通過三步色譜柱分離純化方法，可從