1493.基于過甲酸氧化法pitchplc對18種氨基酸的測定研究

1、學(xué)校代碼：10406分類號：O657.7學(xué)號：130083000015南昌航空大學(xué)碩士學(xué)位論文南昌航空大學(xué)碩士學(xué)位論文（學(xué)位研究生）基于過甲酸氧化法基于過甲酸氧化法PITCHPLC對18種氨基酸的測定研究種氨基酸的測定研究碩士研究生：池小彬?qū)煟宏愃厝A教授申請學(xué)位級別：碩士學(xué)科、專業(yè)：環(huán)境科學(xué)與工程所在單位：環(huán)境與化學(xué)工程學(xué)院答辯日期：2017年6月授予學(xué)位單位：南昌航空大學(xué)I摘要摘要蛋白質(zhì)是生物體結(jié)構(gòu)和生命活動的物質(zhì)基礎(chǔ)，而氨基酸是組

2、成蛋白質(zhì)的基本單位，因此，氨基酸影響著蛋白質(zhì)功能的發(fā)揮，是機體不可或缺的成分。近年來，隨著社會經(jīng)濟的快速發(fā)展和生活節(jié)奏的加快，快餐飲食逐漸流行，營養(yǎng)的不均衡導(dǎo)致的慢性病問題逐漸凸顯。由此，人們愈來愈多地消費各種氨基酸保健品或氨基酸類藥物以滿足人體均衡的營養(yǎng)需求以及對疾病的治療。該類產(chǎn)品中必需氨基酸的含量是否充足、種類是否齊全、比例是否適當(dāng)以及能否被人體充分吸收利用等是評價產(chǎn)品營養(yǎng)價值高低的主要標準。因此，建立一套快速、準確地測定該類食品

3、中氨基酸的方法對上述工作的開展具有重要的現(xiàn)實意義。目前常用高效液相色譜法（HPLC）檢測氨基酸，但是由于大部分氨基酸缺少生色基團，紫外吸收弱，因此需對氨基酸進行衍生。為此，本文以異硫氰酸苯酯（PITC）作為衍生試劑，建立了一套高效液相色譜分析方法，并基于過甲酸氧化對傳統(tǒng)的PITC衍生方法進行改進，拓寬PITC衍生法對氨基酸的檢測范圍。建立了以PITC為柱前衍生試劑的HPLC法測定氨基酸口服液中的氨基酸。通過對PITC衍生劑量、衍生時間、

4、衍生溫度等條件進行了優(yōu)化，選擇合適的衍生條件，同時在HPLC分離過程中考察了流動相緩沖液濃度、pH、柱溫等對氨基酸分離的影響，并對該方法進行了系統(tǒng)性試驗。結(jié)果表明，18種氨基酸能夠?qū)崿F(xiàn)完全分離，各分離度（Rs）均大于1.5。在穩(wěn)定性實驗中，胱氨酸在該衍生條件下不穩(wěn)定，易降解，在16h內(nèi)其峰面積下降94%。為彌補PITCHPLC對胱氨酸測定的不足，通過采用過甲酸對氨基酸樣品進行預(yù)處理，使胱氨酸轉(zhuǎn)換成磺基丙氨酸，然后與PITC進行衍生。由于

5、過甲酸不穩(wěn)定、易揮發(fā)，本文簡易制備了氧化劑過甲酸，并以活性氧含量為指標，考察了制備過程中反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度、過甲酸濃度等對制備的影響。通過正交試驗，篩選出過甲酸的最佳制備條件。結(jié)果表明，過甲酸能將胱氨酸與蛋氨酸分別氧化成磺基丙氨酸與蛋氨酸砜，且氧化產(chǎn)物與PITC衍生后能穩(wěn)定存在。采用上述方法對復(fù)方蛋氨酸膽堿片、胱氨酸片、氨基酸口服液中氨基酸進行了測定，結(jié)果表明該方法具有很好的適用性，可用于對18種氨基酸的準確測定。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：氨基酸