14826.一種新型染料脫色過(guò)氧化物酶的鑒定及表征

1、碩士學(xué)位論文IdentificationandBiochemicalCharacterizationofaNovelDyedecolorizingPeroxidase學(xué)號(hào)：21018006完成日期：2Ql墨生魚(yú)旦大連理工大學(xué)DalianUniversityofTechnology大連理工大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要染料脫色過(guò)氧化物酶(dyedecolorizingperoxidase)是含有血紅素，能降解各種有毒染料的一類(lèi)蛋白，并且可以參與菌體

2、氧化應(yīng)激調(diào)節(jié)，提高菌體對(duì)氧化壓力的抗性。運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌ZymomonasmobilisZM4(ATCC31821)中有一種假定過(guò)氧化物酶基因，它編碼的蛋白(稱(chēng)為ZmDyP)包含與其他染料脫色過(guò)氧化物酶共同保守的氨基酸D149，R239，T254，F(xiàn)256和GXXDG結(jié)構(gòu)基序，說(shuō)明ZmDyP是染料脫色過(guò)氧化物酶家族的一個(gè)新成員。但目前沒(méi)有其酶學(xué)性質(zhì)及功能等相關(guān)報(bào)道。本研究以ZmobilisZM4基因組DNA為模板，通過(guò)PCR擴(kuò)增目的基因，

3、克隆到大腸桿菌表達(dá)載體pET21b()中。構(gòu)建成功的質(zhì)粒pET21bZmDyP轉(zhuǎn)化到EscherichiacoliBL21(DE3)／pLysS中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后，通過(guò)金屬螯合層析純化ZmDyP。SDSPAGE分析，純酶的分子量為36kDa，而活性染色顯示分子量為108kDa，表明這個(gè)酶在活性狀態(tài)下可能是一個(gè)三聚體。光譜掃描顯示ZmDyV有一個(gè)典型的血紅素吸收峰，說(shuō)明它是含有血紅素的蛋白。對(duì)ZmDyV酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)以2，

4、2一二氨一雙(3乙基苯并噻唑6磺酸)ABTS為底物，ZmDyP表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)化效率。意想不到的是，在有高濃度異戊醇的環(huán)境中，不需要H202，ZmDyP與底物反應(yīng)的活性會(huì)增強(qiáng)，這項(xiàng)特性在其它染料脫色過(guò)氧化物酶或血紅素過(guò)氧化物酶中還沒(méi)有研究過(guò)，因此這將是血紅素過(guò)氧化物酶研究的一個(gè)新方向。此外，對(duì)ZmDyP的生理功能進(jìn)行了探索，發(fā)現(xiàn)它很可能通過(guò)提高對(duì)氧化壓力的抗性，賦予宿主菌的生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)。這些研究結(jié)果豐富了染料脫色過(guò)氧化物酶家族信息，并且為Zm