結球甘藍抗TuMV基因的AFLP標記研究.pdf

1、結球甘藍(Brassica oleracea var.capitata)簡稱甘藍,屬于十字花科蕓薹屬,原產于地中海沿岸,是世界上廣泛種植的一種重要蔬菜作物.病毒病是甘藍的一種重要病害.TuMV(Turnip Mosaic Virus)是甘藍病毒病的主要毒原,主要靠蚜蟲以非持續(xù)性方式傳播.采用化學藥劑防治病毒病效果不明顯,培育抗病品種是一種有效的防治途徑.傳統(tǒng)育種在抗病性轉育的過程中,需要人工接種后,根據表型用目測法進行抗病性鑒定,存在費

2、時費力、轉育效率低、因鑒定的誤差有時容易使目標性狀丟失等問題.分子標記輔助選擇(Marker-Assisted Selection, MAS)為在植物抗病育種中目標性狀的選擇提供了一條快速有效的途徑.AFLP標記因其具有多態(tài)性高、重復性好等優(yōu)點,在目標基因標記方面顯示出廣泛的應用前景.該研究以中國農業(yè)科學院蔬菜花卉研究所育成的甘藍感病自交系01-16-5-7和抗病自交系20-2-5及其配制的F<,1>代自交后構建的F<,2>代分離群體為

3、試材.用侵染中國甘藍的TuMV主導致病株系——TuMV-C<,4>對親本和F<,2>的各個單株進行室內人工接種,利用酶聯(lián)免疫吸附測定法對各植株TuMV的抗性進行鑒定.根據鑒定結果采用BSA法選取不同F<,2>單株構建兩對抗感池,應用AFLP分子標記技術篩選與甘藍抗TuMV基因連鎖的分子標記,在分子水平上為甘藍抗TuMV輔助育種提供一種快速有效的方法.主要結果如下:(1)在溫室隔離條件下進行苗期人工接種TuMV-C<,4>株系,經過酶聯(lián)免

4、疫吸附檢測,F<,2>代分離群體中抗病單株和感病單株的比例為3.10:1,對檢測結果進行x<'2>適合性檢驗,xc<'2>=0.053<=3.84,證明其符合3:1的孟德爾遺傳分離規(guī)律,表明該群體中對TuMV的抗性受顯性單基因控制.(2)通過BSA法,從F<,2>代分離群體中選用極端抗病和極端感病的不同單株構建兩對抗感池.應用AFLP技術,對與甘藍抗TuMV基因連鎖的AFLP標記進行了篩選,以8個EcoRI引

5、物,16個MseI引物,組成128個引物組合對抗感池進行篩選,篩選出E<,24>M<,61>引物組合在兩對抗感池中均出現一條相同差異帶,其片斷大小為530bp,暫將該標記命名為E<,24>M<,61>-530.(3)用E<,24>M<,61>引物組合對親本、建池單株和其他的F<,2>單株進一步檢測,并重復三次,結果穩(wěn)定.在所檢測的172個F<,2>群體單株中,只有23株發(fā)生交換,表明篩選到的AFLP標記E<,24>M<,61>-530與