大腸桿菌O157VT噬菌體及VT毒力基因的研究.pdf

1、上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文大腸桿菌O157VT噬菌體及VT毒力基因的研究姓名：張慧英申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：嚴(yán)亞賢孫建和20050101II致死作用強(qiáng)表明菌株毒力因子與致病力之間存在相關(guān)性高致病力的大腸桿菌O157:H7的存在與菌株感染VT噬菌體形成溶源菌株有關(guān)本試驗(yàn)通過絲裂霉素C誘導(dǎo)只具有vt2基因無vt1基因的020324菌株釋放噬菌體利用多種指示菌經(jīng)雙層瓊脂平板法來分離純化VT2噬菌體觀察噬菌斑的特征提純病毒粒子

2、進(jìn)行電鏡觀察并采用PCR的方法檢測噬菌體中vt2基因結(jié)果顯示VT2噬菌體感染MC1061在雙層瓊脂平板上形成的噬菌斑小而混濁多呈磨玻璃樣而首次感染大腸桿菌CC118(pir)此后用MC1061分離的噬菌體再以MC1061為指示菌的在雙層瓊脂平板上形成小而清晰透明的噬菌斑電鏡下噬菌體頭部呈六邊形外廓尾部細(xì)長無尾鞘結(jié)構(gòu)以噬菌體DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增檢測到vt2特異性DNA帶確定編碼VT2毒素的基因位于噬菌體上證實(shí)該菌株為VT噬菌體溶源性

3、菌株相關(guān)研究在國內(nèi)尚未見報(bào)道根據(jù)GenBank中VT2毒素的基因序列設(shè)計(jì)2對引物擴(kuò)增噬菌體上vt2基因的全長AB亞單位將vt2Avt2B擴(kuò)增產(chǎn)物純化后分別插入pMD18T載體測序結(jié)果登錄GenBank同時(shí)利用軟件DNAstar推導(dǎo)氨基酸序列并與GenBank中相應(yīng)序列進(jìn)行比較本試驗(yàn)vt2Avt2B基因的登陸號分別為AY739670AY739671vt2A和vt2B亞單位的基因序列與GenBank中編碼VT2毒素的AB亞單位的核苷酸序列X